石蜡切片(苏木精在-伊红对染法).doc

石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法) 实验原理石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。器材切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。试剂固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。材料鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。实验原理石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 试剂配法： 1固定液：2．苏木精、伊3．1%盐酸乙醇液 盐酸 1份 70%酒精 100份 甘油蛋白贴片剂： 蛋白 50 ml 甘油 50 ml 水杨酸钠（防腐剂） 1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。 实验1．取材 颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或）。切取的组织块不宜太大，以固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块23mm厚。 2．固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入固定液中固定，固定3050min。 水分洗涤 材料经固定后,脱水 70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各0min，放入95%、100%各次，每次20min。各 吸收气中5．透明 纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯（至透明为止）湿气6．透蜡 放入二甲苯和石蜡各半的混合液15min再放入石蜡、石蜡透蜡各分钟。 保持包埋 包埋时，用镊子夹取从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入材料排列整齐切片 将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。 将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。 调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。 调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为410微米。 一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以4050r/min。 切成的蜡带到2030cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。 用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。 切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。 贴片40-45℃，另准备30%乙醇溶液。 ① 切片时，将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。 ② 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在水面上小镊子脱蜡复水石蜡切片经二甲苯、脱蜡各min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各35min，再放入蒸馏水中3min。 11染色 切片放入苏木精中染色约1030min。12．水洗 用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。 13分化 将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约秒至数十秒钟见切片变红，颜色较浅即可 14．漂洗 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。15．脱水 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各35min。 16、复染 用0.5%伊红乙醇液对比染色min。17．脱水