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酶的分离与纯化;酶在分离纯化中应注意的问题;酶的提取、分离纯化技术路线;根据酶提取时,所采用的溶剂或溶液的不同,酶抽提的方法主要
有盐溶液提取,酸溶液提取,碱溶液提取,有机溶剂提取等。;3.碱性溶液提取:
有些酶在碱性条件下溶解度较大,且稳定性较好,宜用碱
溶液提取,操作时注意pH不能过高,以免影响酶活,同时加碱液时要一边搅拌一边缓慢加进,避免局部过碱而引起酶变性失活。;影 响 酶 分 离 纯 化 的 主 要 因 素;;酶 活 力;酶活力的测定方法;③滴定法?如果产物之一是自由的酸性物质可用此法。如脂肪酶
催化脂肪水解,脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法?利用底物和产物光吸收性质的不同,可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。
⑤放射测量法 是酶活力测定中较常用的一种方法。一般用放射性同位素标记底物,在反应进行到一定程度时,分离带放射性同位素标记的产物并进行测定,就可测知反应进行的速度。 ;Evaluation only.
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