植物表达载体pCAMBIA230_省略__ros的构建及其在草莓上的验证_金万梅.pdf

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(3): 389~396 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2014.03.015 植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros的构建及其在草莓上的验证 * 金万梅 王华 北京市农林科学院林业果树研究所，北京100093 *通讯作者，jwm 0809@163.com 摘 要 为了研究多基因互作，减少多次转化的不确定性，本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros (rosea1) 的上下游分别引入CaMV 35S 启动子和nos 终止子，以pBI 121-del和pCAMBIA 1301-ros做中间载 体，并利用BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ产生相同4 碱基末端的片段，在连接酶的作用下将CaMV 35S 启动子分别驱 动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301 上，利用所构建的载体pCAMBIA2301-del- ros通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens) LBA4404 介导的方法转化草莓(FragariaananassaDuch.) ， 并进行PCR 检测，获得转基因草莓。通过组织观察发现，转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色；实时 RT-PCR 分析表明，在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase, ANS) 、查 尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase, CHI) 、查尔酮合酶(chalcone synthase, CHS) 、二羟黄酮醇-4-还原 酶(dihydroflavonol-4-reductase, DFR) 、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase, F3H)和类黄酮-3-O-葡糖 基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase, UFGT)在转基因株系中的表达均上调，这也进一 步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物。本研究结果表明，植 物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建，为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路，也为在植 物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴。 关键词 植物表达载体，构建，草莓，转基因 Construction of Plant Expression Vector pCAMBIA2301- del- ros and Genetic Transformation in Strawberry(FragariaananassaDuch.) JIN Wan-Mei* WANG Hua Institute of Forestry and Pomology, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science, Beijing 100093, China * Corresponding author, jwm0809@163.com Abstract In order to study multi-gene interaction and reduce the blindness of many transformation, CaMV 35S promoter and nos terminator were added into gene del and rosupstream and downstream, respectively. del and ros genes can regulate anthocyanin synthesis. Intermediate vector pBI 121-del and pCAMBIA1301- ros were constructed. BamH Ⅰand BglⅡproduced the same end tetra-nucleotide segments. The CaMV