MTT法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响.pdf

第3O卷 第 1期 天津 中医 药大 学 学 报 Vo1．30 No．1 2011年3月 JournalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine Mar．2Ol】 MTT法检 测银 杏 叶注射 液对 人脑微血管内皮细胞增殖的影响 冰 孟庆楠 ，张皓楠 ，王益民 摘要：旧 的】观察银杏叶注射液对体外培养的人脑微血管内皮细胞增殖的影响。 方【法】体外培养人脑微血 管内皮细胞(HBMEC)，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度银杏叶注射液对 HBMEC增殖的影响。 结【果】与对照组相比较，银杏叶注射液浓度为70mg／L时，对血管内皮细胞无促增殖作用；浓度为 140、210、280、 350mg／L时均具有促进血管内皮细胞增殖的作用，但各组之间相比较无统计学意义。 结【论】银杏叶注射液具有 促进人脑微血管内皮细胞增殖的作用。 关键词：银杏叶注射液；人脑微血管内皮细胞；四甲基偶氮唑盐法 中图分类号 ：R285．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—9043(2011)0l一0036—02 血管内皮细胞的损伤是脑血管病发生的始动 皮细胞株，将其用含 10％胎牛血清的DMEM培养基 环 ”。血管内皮细胞通过释放和合成多种血管活 转移至细胞培养瓶中，置 37℃，5％二氧化碳(C0：) 性因子，在血管 自稳态的调节中发挥着重要作用。 培养箱中继续传代培养，细胞呈贴壁生长 ，待其铺 损伤后的内皮其合成与分泌的血管活性物质和细 满瓶壁时以0．25％胰蛋白酶消化传代，取对数生长 胞因子问的平衡遭到破坏，导致 内皮功能发生障 期的细胞进行实验。 碍，促使单核细胞与血管内皮细胞黏附增强 ，这些 1．2．2 MTr比色法检测银杏叶注射液对人脑微血 改变对脑血管病的发生起着始动作用。银杏叶提取 管内皮细胞的作用 将 80％融合生长的人脑微血 物为银杏科植物银杏干燥叶的提取物，主要成分为 管内皮细胞以混合消化液消化，收集细胞 ，完全培 银杏总黄酮，主要用于急慢性脑功能不全及其后遗 养基稀释后以2x10个，IJ的密度接种于96孔板 ， 症的治疗 ，具有扩张脑血管 ，改善脑缺血产生的症 每孑L100IxL。正常培养 12h后，使细胞贴壁。每组各 状和记忆功能。本研究以体外培养人脑微血管内皮 加入银杏叶注射液 (原浓度 3500mg／L)2、4、6、8、 细胞(HBMEC)的方法，观察银杏叶提取物注射液对 10IxL，使银杏叶注射液的终浓度依次为：70mg／L 人脑微血管内皮细胞增殖的影响，进一步明确银杏 (1组 )、140mg／L(2组 )、210mg／L(3组 )、280mg／L 叶提取物对脑微血管内皮细胞的保护作用。 (4组)、350mg／L(5组)，共设 5个浓度，每组 l2个 1 材料与方法 复孑L，并设对照组 (含 5％胎牛血清的培养基及细 1,1实验试剂与仪器 银杏叶注射液(山西银湖制 胞)及空 白孔(5％胎牛血清培养基)。培养48h后， 药有限责任公司，批号；人脑微血管内 移出培养液 ，换人 pH7．2～7．4磷酸盐缓冲溶液 皮细胞株 (美国ATCC公司)；胰酶 、DMEM低糖培 (PBS)100 L／孔 ，清洗 2遍 ，移出PBS液，并于每孔 养粉、优级胎牛血清(美国Gibco公司)；四甲基偶氮 加入MTF(5g／L)20ixL。继续培养4h后，吸弃原培 唑蓝 (M1Tr)、二 甲亚砜 (美 国Sigma公司)；酶标仪 养液，每孔中加入二甲基亚砜 (DMSO)150IxL，置摇 (奥地利 Sunrise)。 床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解 ，并