天花粉蛋白对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究.docVIP

　　天花粉蛋白对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究 作者：张艳琼， 黄利鸣， 吴江锋 【摘要】 　　目的通过建立荷U14小鼠宫颈癌模型，从个体水平初步探索天花粉蛋白（TCS）对荷瘤小鼠体内抗肿瘤活性。方法建立荷U14小鼠宫颈癌模型，TCS 治疗 ，检测抑瘤率、脾指数、流式细胞术分析T细胞亚群。结果TCS治疗组，脾指数明显高于阴性对照组，C较阴性对照组、CTX组明显减少（Plt;0.05）；与正常组比较无显著性差异。TCS组的C/C较阴性对照组、正常组明显增大（Plt;0.05）；与CTX组比较无显著性差异。结论在体内，当TCS的剂量为0.2 mg/kg时，具有一定的免疫调节和增强体液免疫功能作用。 【关键词】 天花粉蛋白 荷瘤鼠 抑瘤作用 　　Abstract：Objective To study the anti-tumor effect of trichosanthin(TCS) in U14 mice.MethodsAfter setting up the animal model of U14, the subset of the T cells or inhibitory rate, the index of spleen and FCM. ResultsAfter treatment al group. The C/C in TCS group al groups（Plt;0.05）, but had no siguificant difference as pared munity and increase the humoral immunity in vivo g/kg. 　　Key or; Effect of tumor- inhibition 　　人子宫颈癌是导致妇女死亡的一种常见恶性肿瘤。天花粉蛋白（trichosanthin，TCS)是从葫芦科植物栝楼trichosanthin kirilouii Maxim的块根中提取的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protEin，RIP)。体外大量实验证实其具有抗宫颈癌的作用［1，2］，为进一步证实TCS是否具有体内抗宫颈癌和调节机体免疫的活性，我们进行了TCS对荷小鼠宫颈磷癌U14裸鼠体内实验研究。 　　 1 材料 　　1.1 材料TCS购自上海金山制药厂（1.2mg/ml）；环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司； RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；PE标记C抗体购自eBioscience公司；FITC标记C抗体购自eBioscience 公司；倒置显微镜和多功能显微镜及图像分析系统购自德国LEIca公司；EPICSXL-4型流式细胞仪购自Beckman coulter公司。U14肿瘤细胞株由三峡大学医学院免疫重点实验室提供。 　　1.2 动物6～8周龄近交系Balb/c小鼠32只，体质量18～20 g，雌性，购自武汉大学实验动物中心。 　　 2 方法 　　2.1 TCS对实体瘤的抑制作用复苏U14细胞株，昆明小鼠腹腔中反复传代，第3代后5～7 d，取小鼠腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度为2×107/ml。常规消毒后，取0.2 ml细胞悬液接种于Balb/c小鼠右侧腋窝皮下。接种后的小鼠随机分3组：TCS实验组、阴性和阳性对照组，每组8只。TCS实验组：用生理盐水稀释TCS注射液，药物浓度为0.2 mg/kg，0.2 ml/只，给药1次/d，连续给药10次。阳性对照组：环磷酰胺（cytoxan, CTX），30 mg/kg。阴性对照组给予等体积的生理盐水。另设正常组8只，不进行任何处理。 　　2.2 组织取材和称重第11天称小鼠体质量。眼球取血，置于加有抗凝剂的试管内。处死小鼠，取出肿瘤组织、脾脏，称瘤重、脾重， 计算 抑瘤率(inhibition rate, IR)。计算脾指数，公式为：脾指数(SI)=脾脏重量(S)/体质量(in。每个试管内加入溶血剂2 ml，颠倒混匀后放暗处10 min，离心，用PBS洗1次，加1%甲醛PBS液0.6 ml，固定10～30 min，经流式细胞仪检测每管中C，C细胞百分比。 　　2.4 统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS10.0软件进行分析（t检验）。 　　 3 结果 　　3.1 小鼠一般情况的观察小鼠皮下接种U14瘤细胞5 d内外观无明显的变化，活泼，大小便、饮食正常；接种癌细胞5～7 d后可触及皮下肿块，成瘤率100%，生理盐水组后期肿瘤生长迅速。 　　3.2 TCS对荷瘤小鼠体质量、脾重和瘤重的影响结果见表1。表1 荷瘤小鼠的体质量、脾指数、瘤重和抑瘤率（略） 　　3.3 流式细胞仪检测T细胞亚群的结果实验结果表明：①阳性对照组的C较其它各组