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两类苏云金芽胞杆菌Cry1Ac蛋白杀玉米螟活性的比较.pdf
第 53 卷第 23 期 湖北农业科学 Vo l. 53 No.23
2014 年 12 月 Hubei Agricultural 5ciences Dec. ,2014
两类苏云金芽胞忏菌CrylAc 蛋白杀五米惧
活性的比较
田宇曦，刘晓艳，张志刚，杨自文
(湖北省农业科学院/湖北省生物农药工程研究中心，武汉 430064)
摘要:通过 PCR 技术将 2 种不同来源的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis ， 简称 Bt)crylAc 蛋白基因
克隆到大肠杆菌 pGEX-6P-l 表达载体，并转化到宿主菌 BL21 ，采用 IPTG 进行诱导表达，并用亲和层析
法进行融合蛋白的纯化，纯化后的蛋白质进行玉米琪的室内生物测定试验。结采表明，来自 Bt 菌株
NBIN-866 的 CrylAc 蛋白杀玉米琪的 LC到为 65.39μglmL，来自由茵株 NBIC-380 的 CrylAc 蛋白杀玉
为
米琪的 LC 15.07 问/mL，后者具有更高的杀虫活性。氨基酸序列比对发现来自茵株 NBIC-380 的
Ð
CrylAc 氨基酸序列的 71 位和 393 位都为丝氨酸 5 ，而 NBIN-866 的都为脯氨酸 P ，推测这两个位点的氢
基酸的变化可能是影响毒性大小的重要因素。
关键词:苏云金芽月色杆菌 (Bacillω thuringiensis) ;Cry lAc; 融合蛋白;玉米琪;活性比较中图分类号 :5188
中图分类号:5476 文献标i只码 :A 文章编号:0439-8114(2014)23-5742-03
DOI: 10.14088/ki .issn0439-8114.2014.23 .029
Comparing the Activity of Killing Corn Borer between Two CrylAcs from Different
Bacillus thuringiensis
TIAN Yu-xi ,LIU Xiao-yan ,ZHANG Zhi-gang ,YANG Zi-wen
(Center of Bio-Pesticide Engineering Research ,Hubei Academy of Agricultural Sciences ,Wuhan 430064 ,China)
Abstract: The cry lAc genes from two different Bacillus 仇uringiensis strains were cloned to Escherichia coli expression vector
pGEX-6P-l by PCR technology and transformed the recombinant plasmid into strain BL2 1. With IPTG the recombinant strains
were induced expression. The expressed fusion proteins were purified with affinity chromatography. The insecticidal activity of
the purified proteins were tested with com borers indoor. Results showed that LCÐ value of CrylAc fus
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