蛋白印迹.pptVIP

* 8. 膜的重复利用(Membrane recovery) 如果蛋白样品非常宝贵，可以使用Western一抗二抗去除液处理蛋白膜，以重复利用蛋白膜。 两种方法都不能去除由显色检测系统产生的有色沉淀物（例如BCIP、4-CN、DAB和TMB）。然而，仍可以用针对不同靶蛋白的特异性抗体分析印迹膜。 重要提示：在各次免疫检测之间不应使印迹膜干燥。印迹膜干燥将会使任何剩余抗体与膜永久性结合。 通过加热和去污剂进行解吸 仪器和溶液： 解吸液：100mM 2-巯基乙醇，2%（w/v）SDS，62.5 mM Tris-HCl，pH6.7 磷酸盐缓冲液（PBS）：10mM 磷酸钠，pH7.2，0.9%（w/v）NaCl 浅托盘，大小足以将膜放入其中。 操作： 1. 在通风橱中，将印迹膜放入解吸液中在50℃下振摇30分钟。 2. 将印迹膜放入缓冲液中振摇10分钟。用新缓冲液重复漂洗两次。 3. （可选）重复起始检测方法（忽略一抗步骤），确保已灭活抗体或已从膜上解吸抗体。 4. 将印迹膜放入缓冲液中振摇10分钟。 5. 继续下一轮检测的封闭步骤。 酸解吸 仪器和溶液： 解吸液：25mM 甘氨酸- HCl，pH2，1%（w/v）SDS 磷酸盐缓冲液（PBS）：10mM 磷酸钠，pH7.2，0.9%（w/v）NaCl 浅托盘，大小足以将膜放入其中。 操作： 1. 将印迹膜放入解吸液中振摇30分钟