法医学难检样品的处理及检测方法研究.pdf

维普资讯 · 综 述 · 刑事技术2001年第6期 法 医学难检样 品的处理及检测方法研 究 浙江酋嘉善县公安局I314100) 姚军平 华西医科大学法医学院(成都6100411辛军平 粱伟波 粤 淼 陈国弟 张 林 摘 要 在法医物证检验 中膏常会遇到一些量微而保存条件差的检材，这类检材的成功分析对案件的调 查和侦破常起着至美重要的作用，其美键在于能否正确提取和处理检材、并采用适当的分析方击进行检测 笔 者结合多年的物证检验经验和研究 综述 了常见的牙齿、烟头、毛发、微量血痕等检材的有效处理方法 关键词 生物检材 DNA提取 STR检测 自从PCR技术应用到法医学物证的检验以来，许 常规的提取过程 中用简易的方法陈去杂质。第一种 多长期困扰法医工作者的问题得到了很好的解决，如 方法的优点是显而易见的．所提取的DNA纯度高． 胎儿羊水的亲子鉴定，轮奸案中的阴道 一精液混合斑 主要有免疫磁珠法和 lmmot，ilon—P滤膜法 ．‘前者 的多个嫌疑人的认定hI，尤其是应用 STR基因座进行 是利用抗人独特性抗体包被磁珠 以吸附人细胞．再 分析，可以完戍许多腐败或微量检材的检恻，使得利 用磁器收集磁珠 、蛋 白酶K消化 、释放DNA；后者是 用骨头、口腔脱落细胞及月经纸进行亲子鉴定也变得 利用 Immobilon—P滤膜的亲蛋 白和疏核酸的特性， 轻而易举n1。尽管如此，在一些特殊案件中，所能获得 直接吸附细胞，在膜上原位消化、释放DNA。这种方 的检村 自然有限．加上腐败或其他杂质的严重影响， 法对病毒颗粒的分离极为有效，但在法医学中，受试 给检测带来了极大的困难。现在把这类检村称作难检 剂来源的限制，应用极少。其实，在常规的提取过程 样品，笔者对它们的处理原则是，尽可能除去杂质，最 中，针对不同的检材，用特定的方式尽可能除去杂质 大限度保留DNA．选取敏感基因座分析。 而制备的DNA膜板常常可 以满足PCR扩增和检测 1 检材的处理 的需要。PCR扩增对 DNA膜板的要求并不高，只要 常见的杂质来源于检材所在的载体 ，如泥土，石 抑制扩增的因素被去除，PCR扩增条件被优化，对从 灰，油脂，粪便，腐败组织等。对这些混有杂质的样品 肉跟可见石灰吸附的血痕，3根带毛囊的毛根，1个 的处理有两个层次 ．其一 ，是用特殊的试剂或设备吸 牙根 ，1个烟头提取的DNA的扩增，均可获得可检测 附DNA或细胞 ，洗去杂质 ，再释放 DNA。其二，是在 的PCR产物 见表 1、2)。 表 1从不同检材中制备DNA膜扳的方法 2 选取敏感基因座 ，优化 PCR体系进行分析 但选用等位基因片段小，扩增效率高的STR基因座 腐败及理化因素对 DNA的完整性有较大影响 能够一定程度地船决这个 问题，对应用上述方法从 33 维普资讯 石灰上吸附的血痕 (直径 1～2ram)，带毛囊的毛根 (3 扩增的敏感性高低并不与此片段大小顺序相同，推测 根)，死后一个月的牙根 【1个)，地板上放置一个月的 可能与DNA易断裂的部位有关，所以，尽管基因座的 的烟头 (1个)中制备的DNA膜板进行基因座敏感性 敏感性的高低一定程度上与等位基因片段大小相关， 研究，结果表 明TH0I，D3Sl754，D12S391，PLA2A， 但其不是唯一的决定因素，基因座的敏感性应由调查 NOTCH4及 D19S400等 6个基因座敏感性好 ，按文 获得 。 献一sI的方法对上述样 品的检测均获得满意的结果 检测方法的优化对含量微、不完整膜板 DNA样 (见．表 2)