广防己配伍黄芪肾毒性的代谢组学研究.docVIP

　　广防己配伍黄芪肾毒性的代谢组学研究 作者：梁琦　谢鸣　倪诚　颜贤忠　张艳霞 【摘要】 利用代谢组学技术研究大鼠口服广防己及其配伍黄芪水煎液后尿液代谢图谱的变化，探讨黄芪配伍广防己对肾脏的减毒作用。［方法］雄性etabonomics profile of in the urine samples of rat dosed inistrated by 8.1g/kg-1 of Aristolochia fangchi, the GQ group inistrated by 9.1g/kg-1 of Aristolochia fangchi patible e of distilled ical analysis and histopathological examination arkedly higher than those of the control group (Plt;0.01) itigated the kidney pathological of G group, pared to control group, the urinary concentrations of citrate, 2oxoglutarate, Hippurate, Glucose in G group decreased, etabolites in GQ group etabonomic analysis of rat urine samples as ical analysis and histopathological examinations. patible e inhibition effect on renal toxicity of Aristolochiae fangchi. 　　Key etabonomics; nuclear magic resonace(NMR); pattern recognition 在常规毒理研究的基础上，运用代谢组学技术手段，比较观察了广防己及其配伍黄芪的肾毒性，以观察黄芪配伍广防己可能具有的减毒作用。 　 　1 材料 　　1.1 动物 　　SD大鼠，雄性，SPF级，体重(130±10)g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。北京中医药大学动物饲养房（屏障系统）饲养， 自然 明暗周期,室温24℃,湿度：55％，动物提前1g/g。黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var mongholicus (Bge.) Hsiao的干燥根，HPLC方法测得黄芪甲苷0.540mg/g。 　　1.3 水煎剂 　　取广防己药材2000g，标记为药材a，另取广防己药材2000g，黄芪药材250g，合并标记为药材b。分别将药材a、b分别置于提取罐中，加相当于药材10倍体积的冷水浸泡1h，加热至沸腾，煎煮1h，倾出药液，残渣加入9倍体积的水，煎煮1h后取药液，合并2次药液，过滤。其中水煎剂a减压浓缩至2469ml药液，相当于1ml含生药0.81g，采用HPLC方法测得其马兜铃酸含量为0.319mg/ml；水煎剂b减压浓缩至2473ml药液，相当于1ml含生药0.91g，采用HPLC方法测得其马兜铃酸含量为0.192mg/ml。二种水煎液均置4℃冷藏，备用。 　　1.4 仪器 　　Varian UNITY INOVA 600兆超导脉冲傅里叶变换NMR谱仪,美国Varian公司产品；7020全自动生化分析仪,日本日立公司产品。 　 　2 方法 　　2.1 动物分组及处理 　　大鼠随机分为正常对照组、广防己组、广芪组三组，每组8只。广防己组、广芪组动物均按1ml/kg给以相应药物灌胃，每日1次,连续给药4. 　　2.3 血浆收集与处理 　　离心制备血浆，全自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平。 　　2.4 数据处理 　　所得数据均用均数±标准差(x±s)表示，组间差异采用q检验，由SPSS13.0统计软件处理。 　　2.5 肾脏病 理学 检查 　　各组大鼠肾脏用生理盐水冲净后，按HE常规制片，于光镜下观察。 　　2.6 代谢组学测定与分析 　　2.6.1 NMR测量前尿样准备 　　各组取5个尿液样本常温解冻，精密吸取300μl尿样，加入300μl缓冲液(0.2M Na2HPO4/NaH2PO4,pH7.4),混匀，13000rpm，10min离心，取上清500μl,添加30ul 1%TSP；转入5mm样品管中进行测试。 NMR数据采集与分析：数据在Varian UNITY INOVA 600超导脉冲傅里叶变换NMR谱仪上采集。采用有预饱和的1D NOESY脉冲序列，取如下参数：谱宽7996 Hz，混合时间0.10