分子生物学（贾海燕）第九章.docxVIP

第九章　真核生物的转录和调控一、真核生物基因转录的基本特征真核生物RNA聚合酶种类酶位置α-鹅膏蕈碱敏感性转录的基因RNA Pol I核仁不敏感rRNARNAPol II核质敏感hnRNARNAPol III核质存在某种特异性tRNA,5SrRNA, snRNAα-鹅膏蕈碱：一种来自真菌毒蕈的八肽二环的剧毒物。在不同的浓度下，它对真核生物的三种RNA聚合酶有不同的抑制作用。hnRNA：核内不均一RNA，是存在于真核生物细胞核中的不稳定、大小不均的一组高分子RNA的总称。hnRNA在细胞核内存在时间极短，经过剪接形成成熟的mRNA，并依靠特殊的机制转移到细胞质中。snRNA：小核RNA，真核生物细胞核中的100~300碱基的小分子RNA，一般以核糖核蛋白形式（snRNP）参与mRNA的剪接。（核酶）RNA聚合酶亚基所有这三种聚合酶都是含有12个或更多亚基的大分子。晶体结构研究表明，无论是原核生物还是真核生物，RNA聚合酶有着共同的结构形态，形状大体像一个蟹爪。真核生物RNA聚合酶的活性：功能与原核生物相同，但在启动子识别和转录起始前需要额外的转录因子的参与。RNA聚合酶II的羧基末端结构域（CTD）：Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser序列在RNA聚合酶II的羧基端的高度重复，对酶活性是必需的。CTD序列可在丝氨酸和某些络氨酸处磷酸化。有研究表明，CTD的去磷酸化与启动转录有关。但在转录延伸过程中，随着RNA聚合酶离开启动子，CTD又被磷酸化。转录因子转录因子（transcription factor, TF）是转录起始过程中RNA聚合酶所需要的辅助因子。转录因子是参与正调控的反式作用因子，在无转录因子时，RNA聚合酶不能起始转录。转录因子通常识别位于基因上游启动子附近的顺式作用元件。启动子序列说明：a) 转录起始位点： PyAPy（Py=任何嘧啶)b) TATA box：位于-35~-25区，包含如下共有碱基序列：5’-TATA (A/T) A-3’c) CAAT box：位于-80~-70区，包含如下共有碱基序列：5’-GGCCAATT-3’d) GC box：位于-180~-80区，包含如下共有碱基序列：5’-GCCACACCC-3’或5’-GGGCGGG-3’e) 习惯上，将TATA区上游的保守序列称为上游启动子原件（UPE）或上游激活序列（UAS）。图解1. 原核基因启动区范围较小，而真核基因的启动区范围较大。2. TATA区与-10序列相对应，CAAT区与-35序列相对应。3. TATA区的主要作用是使转录精确地起始；CAAT区和GC区能显著地影响基因表达的水平。增强子 (enhancer)：增强子 (enhancer)：能从启动子的上游或下游数千个碱基处来激活转录的序列元件。增强子可以是组织特异性的，也可以具有广泛的活性。增强子特点：远距离效应：一般位于上游-200 bp处，但即使相距10 kb也能发挥作用。无方向性：无论位于靶基因的上游、下游或基因内部都可发挥增强转录的作用。顺式调节：只调节位于同一染色体上的靶基因。无物种和基因的特异性：可以连接到异源基因上发挥作用。具有组织特异性：相同增强子在不同组织中增强转录的作用不一定相同。有相位性：其作用和DNA的构象有关。有的增强子可以对外部信号产生反应：如热休克基因在高温下才表达。转录调节：在原核生物中，主要是负调控。一个抑制子通常对几个连续的基因进行协同调控。有些抑制子可以调控多个操纵子，因此被称为调节子。在真核生物中，主要是正调控，而且通常只作用于某一转录事件中单个基因的表达。转录因子一般都是作为转录激活因子参与调控。转录过程：a) 起始，不同RNA聚合酶有不同的过程。转录开始时，在启动子处装配全酶。b) 链延长：转录因子离开RNA聚合酶。c) 终止：机制不清楚。二、RNA聚合酶I负责的转录RNA聚合酶I只转录rRNA基因，细胞中70%的总RNA是rRNA。rRNA基因以串连重复形式成簇存在于核仁组织区（NOR）。每个重复单位构成一个转录单位。rRNA基因的转录产物是前体rRNA转录本，然后被加工成28S（5000 nt）, 18S（2000 nt）和5.8S rRNA（160 nt）。不同物种的rRNA基因及其前体rRNA转录本的大小有差异。rRNA基因启动子（ 比较单一 ）核心元件：包括转录起始点，-45~+20, GC-rich，核心元件单独存在时就足以起始转录。上游控制元件（UCE）：-180 ~ -107, GC-rich，它能有效地增强转录效率。转录因子上游结合因子 (UBF): 与UCE和核心元件上游序列结合，可通过蛋白-蛋白相互作用形成环状DNA结构。选择因子1 (SL1): 结合并稳定UBF-UCE复合体，并与核心元件下游序列结