分子生物学实验：实验六 DNA的酶切、电泳与Southern杂交.pptVIP

孔忠新 实验目的 学习并掌握DNA酶切、电泳技术 学习掌握Southern杂交的原理和技术 实验原理 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类： Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰（甲基化）作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。 Ⅱ类由两种酶组成： 一种为限制性内切核酸酶（限制酶）,它切割某一特异的核苷酸序列； 另一种为独立的甲基化酶，它修饰同一识别序列。 Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。 Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。 绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列：5- G↓AATTC-3)，有少数酶识别更长的序列或简并序列。 Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ：5-CCC↓GGG-3);有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端，如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。 5 5 GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG EcoRI 5 G CTTAA