三种白癜风抗原肽HLA-A 0201四聚体的构建和临床初步应用.pdfVIP

」 向 月 9 oue KAm 2 浙江大学学报(医学版) 却 M qu e m JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES) http:// www. joumals. 习u. edu. cn/med DOI: 10. 3785/j. issn. 1 ∞8-9292.2014.09.012 ·原著· 三种白癫风抗原肤 HLA-A * 0201 四聚体的构建和 临床初步应用 吴俊琪l ，石佳2 ，董1itlJ牵2 ，蒋亦秀3 ，庄顺红1 ，杨军4 1.浙江大学金华医院检验科，浙江金华 321ωo 2. 北京旷博生物技术有限公司，北京 100176 3. 金华市第五医院皮肤科，浙江金华 321000 4. 杭州师范大学医学院公共卫生系，浙江杭州 310016 [摘 要] 甸的:体外构建三种白痪风抗原肤 HLA-A 0201 复合物四聚体，并用 其检测白癫风患者外周血中抗原特异性细胞毒性 CD8+T 细胞( CTL) 。方自去:取原 核表达 HLA0201 • -BSP 和自2 M MelanA 26-35 、 gpl00 209-217 、 蛋白，分别同 tyrosinase 1-9 三种白痕风抗原肤进行体外复性折叠，形成可溶性抗原肤 HLA-A 0201 复合物，经 BirA 酶作用并通过凝肢过滤层析法纯化得复合物单体，再与藻红 蛋白标记的链霉亲合素按4: 1 比例搞合成四聚体，并采用斑点印迹法对上述构建 的四聚体进行鉴定。运用流式细胞术检测分析该四聚体结合白痕风患者外周血中 特异性 CTL 的能力。结果:斑点印迹检测显示三种具有天然构象的生物素化的白 瘫风抗原且大 HLA-A 0201 四聚体复合物构建成功;流式细胞术检测结果显示所制 备的回聚体可与白痕风患者血液中抗原特异性 CTL 结合。结份:成功和j 备了三种 具有完整构象的生物素化白痕风抗原肤 HLA-A 0201 四聚体，此四聚体均可检测 白痕风抗原特异性 CTL。 [关键词] 白瘾风; HLA-A 抗原;自2 微球蛋白;抗原抗体复合物;T 淋巴细胞， 细胞毒性;聚合物;肤类 [中图分类号] R758. 4 + 1 [文献标志码] A Construction of three HLA-A * 0201-peptide tetramers and their preliminary application in detection of vitiligo-specific cytotoxic T