多管发酵法-崑山电子历程.doc

濾膜法 吳季庭 龔筑蓁 王禾迎 1.實驗目的:以濾膜法檢測水樣中的大腸菌類數量，利用M-endo agar培養基或M-endo培養液培養大腸菌類以及大腸菌類所形成隻綠色金屬光澤菌落進行計數。 2.原理:為大腸菌類細菌會在含乳糖Endotype 培養基中，35℃，24小時內即可發展出帶金屬光澤之紅色菌落，而一般而言，缺少金屬光澤之所有紅色、粉紅色、藍色、白色或無色菌落，均非大腸菌類的菌 落。在標準檢驗法中所使用的培養基有兩種：LES Endo agar 及 M-Endo medium，其主要成分大致相同，含酵母抽出液、Casitone或 trypicase、thiopeptone或thiotone、tryptose、乳糖、K2HPO4、KH2PO4、NaCl、Sodium lauryl sulfate、Na2SO3、洋菜等，但兩種培養基成分比例不同。當培養基置入培養皿冷卻後凝固備用，水樣通過已消毒之濾膜，則可將濾膜置於培養皿上培 養，於(35±1)下之培養箱中培養經過24小時後，即可觀察大腸菌落之數目，以菌落計數器計算之。 = = 187 = =320 = =103 = =7?03 
= =4?04 = =3?05 6.問題: 1.比較同一樣品以濾膜法，多管發酵法二種實驗方法鎖紀錄整理出來的數據，並參照法規，所訂定之標準，是否樣品超過標準及受到大桿腸菌之污染?請進行合理的解釋和推論。 如水樣受到大腸桿菌的汙染，表示取樣地點受到汙染比較嚴重，也可能因實驗過程，用具受到汙染，因此實驗結果會有偏差造成數據不正確。 2.試敘濾膜與多管發酵法之間之異同及優缺點? 濾膜法:優點:水樣不需特別處理。 短時間可獲得結果。 需要的水樣較多，可增加靈敏度。 缺點:易受環境污染，失去準確度。 若濃度太高時，會阻塞濾膜。 多管發酵；優點:不易受污染，而失去準確值。 濁度高也能檢測。 缺點:製作培養基較麻煩。 需要較長的時間方能獲得結果。 3.試敘多管發酵法與濾膜法中所以用的LST、BGLB、EMB培養皿 M-endo培養基(液)之特性，並說明其主要用途為何? ＬＳＴ 特性：水中如有大腸菌類會用LST培養基裡面的乳糖作為碳源產生氣體，為陽性反應，其他無法利用者，則是受到抑制無法生長,LST培養基中含有膽鹽作為表面張力的抑制劑，可抑制大腸菌類以外的菌種生長。 用途：工業廢水、市鎮廢水、污水處理廠放流水、以污染嚴重之水樣、處理廠各操作單元之水樣。 ＢＧＬＢ 特性：是一種選擇性的培養基，成分除了含有乳糖之外，添加煌綠和膽汁可抑制 格蘭氏陽性（G+）及生成胞子的微生物生長，以BGLB培養基培養將可以使大腸菌類大量增殖。 用途：過去紀錄顯示推定試驗不合要求之水樣，例行檢驗飲用水，水廠配水，各 　　　處理階段之水樣，污水廠中加氯消毒處理之待放流水，浴用水。 ＥＭＢ培養皿 特性：可抑制格蘭氏陽性菌生長，並於酸性環境中沉澱於大腸菌菌落上，形成墨綠色金屬光澤，用此一特殊的生理特性來鑑別大腸菌類，再利用格蘭氏染色進行染色LST培養基確定是否產生氣體。 用途：原水或配水之水質控制，決定給水是否合乎安全。 Ｍ-Ｅｎｄｏ培養基 特性：大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會和培養基中的鹼性洋紅染料結合產生在陽光反射下出現的綠色金屬光澤，依據這個來計算大腸菌類的數目。 用途：實驗中來判定是否有大腸菌類。 4.試問濾膜法之操作流程?其實驗結果如何決定待測水樣中是否有大腸菌類? 1.(1)取水樣。 (2)取1.53g的M-Endo agar (51/1000=X/30 X=1.53) + 30ml的二段水 + 0.6ml的酒精(20/1000=Y/30 Y=0.6) (3)放磁石進去，並在電磁加熱攪拌器上加熱(蓋上蓋子， 其中蓋子不能鎖緊，並且以紙箱圍住隔離)，等待沸騰， 沸騰後要移除瓶子。 (4)沸騰後，再裝入6個培養皿內，等凝固。 (5)拿6個燒杯，一個裝崑山湖水110ml，其他作為稀釋， 原液11ml，培養液100ml，呈原液，10-1，10-2，10-3， 10-4，10-5 共六瓶。 (6)第4和第5個步驟完成後，要進行過濾抽氣。