【医学超级全之生机能实验】实验七、DIC.pptVIP

* * 实验七 弥散性血管内凝血 一、目的 1. 学习DIC动物模型复制方法； 2. 学习血液学指标（PT、KPTT）的测定； 了解急性DIC的诊断标准和实验室检查方法 3. 讨论DIC的发病机制；锻炼动手操作能力 二、器材、药品 手术器械、托盘天平、离心机、水浴箱、试管、移液枪、秒表 1.5%戊巴比妥钠、4%兔脑粉、P试液、K试液、3.8%枸橼酸钠 0.025mol/L CaCl2溶液 三、方法、步骤 1. 称重→麻醉（1.5%戊巴比妥钠，2 mL/kg）→分离颈总动脉→插入插管→取血于抗凝管中至 4 mL，混匀。 2. 头皮针扎入耳缘静脉，注射4%兔脑粉稀释液30 mL， ① 1 mL/min × 5 min 注射方式与速度为： ② 2 mL/min × 5 min ③ 3 mL/min × 5 min 注射结束后，立即取血至4 mL ，混匀。 3. 间隔30 min后，再次取血至4 mL ，混匀。 4. 取血样本平衡后，以 2500 rpm离心10 min，取上清液 测定PT、KPTT。 血1 血2 血3 0.4 ml 3.8%枸橼酸钠 4 ml ① 1 ① 2 ① 3 A 远心端 近心端 活结 组别 管号 5. PT测定： 37℃ 水浴1 min 取0.1mL血浆 加入P试剂0.2mL ，开始计时， 侧动试管，直至液体停止流动（呈胶冻状）或出现白色粗颗粒时，即为凝固终点→计时停止，记录凝血时间。 6. KPTT测定： 37℃ 水浴2 min 取0.2mL血浆，加K试剂0.2mL 加入CaCl2 0.2 mL， 观察方法同上，记录凝血时间。 四、实验结果 表一 静脉注射兔脑粉对家兔血液学指标的影响 第5组 第3组 注射后30min 第1组 第2组 注射后 第6组 第4组 注射前 KPTT(S) PT (S) 组 别 血清：血液凝固之后的淡黄色液体。 血浆：血液抗凝后，除去血细胞后的淡黄色液体。 区别：血浆存在凝血因子，而血清没有。 五、分析讨论 1、在家兔实验性DIC实验中，影响实验成败的最重要因素是什么？ 2、家兔实验性DIC的致病原因是什么？ 3、PT、KPTT测定的原理是什么？ 4、在实验性DIC实验中，PT和KPTT明显延长的原因是什么？ 六、注意事项 1. 戊巴比妥钠毒性大，勿麻醉过量； 2. 动脉插管固定线，打活结，以便解开； 3. 放血速度中等，不宜过快或过慢；量要把握好，不宜过多或过少； 4. 取血后，立即以大拇指堵住管口，颠倒混匀6-7次； 5. 每次取血后，立即更换插管，并及时清洗换下的插管； 6. 抗凝管每次取一支，用到哪支取哪支，禁止全部拿到实验台； 7. 插管及其他器械均要洗净、擦干、回收，家兔处死。 8. 三根插管、动脉夹、眼科镊放入小塑料杯中。 （1）凝血酶原时间（prothrombin time，PT）测定原理：