浅析大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究.docVIP

　　浅析大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究 【摘要】 　　目的: 获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子（rHRF）, 并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。方法: 克隆r）约为24000; 重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原, 且呈剂量依赖关系。 结论: rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能, 可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用, 为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础。 【关键词】 大鼠 IgE依赖组胺释放因子 基因克隆 原核表达 肥大细胞 组胺 　　[Abstract] AIM: To clone and express the gene encoding rat IgEdependent histaminereleasing factor (rHRF) and to study the effect of rebinant rHRF to induce histamine release from rat sensitized mast cells. METHODS: The plete coding region of rHRF ast cells obtained from the lungs of OVAimmunized rats ulated by rebinant rHRF at different concentration. The released histamine easured by the OPT spectrofluorometric procedure. RESULTS: The cloned DNA fragment shoino acid sequence identity RNA of rat IgEdependent histaminereleasing factor (or translationally controlled tumor protEin) in GenBank. The rebinant rHRF shoine releasing from the sensitized mast cells in a dosedependent manner. CONCLUSION: The rebinant rHRF, ine release from sensitized mast cells, portant role in the allergen diseases. 　　[Keyinereleasing factor; gene cloning; prokaryotic expression; mast cell; histamine 　　组胺释放因子是一大类具有促进肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组胺等介质的生物活性物质的总称。根据发挥作用时对IgE依赖与否, 可分为IgE非依赖性和IgE依赖性两类。1995年MacDonald等[1]从人巨噬细胞系U937培养上清中鉴定出一种IgE依赖组胺释放因子, 并证实其与人的翻译控制肿瘤蛋白（translationally controlled tumor protein, TCTP）为同一蛋白, 与小鼠TCTP氨基酸序列具有94%同源性。IgE依赖组胺释放因子可促进嗜碱性粒细胞释放组胺、 IL4、 IL13[2]; 促进B细胞增殖和分泌免疫球蛋白[3]; 促进嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞释放IL8[4, 5], 同时发挥嗜酸性粒细胞趋化因子作用[4], 引起局部炎症细胞聚集。因此认为该蛋白在Ⅰ型变态反应过程中发挥重要调节作用。肥大细胞是Ⅰ型超敏反应的关键效应细胞, 激活后释放组胺等多种介质。关于IgE依赖组胺释放因子对肥大细胞的作用未见报道。本研究旨在获得大鼠IgE依赖组胺释放因子（rat IgEdependent histaminereleasing factor, rHRF）重组蛋白, 观察其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能, 为以大鼠为模型进一步探讨IgE依赖组胺释放因子在Ⅰ型超敏反应发生过程中的作用奠定基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 109、 BL21（DE3）由本实验室保存; 核酸电泳Mr标准、 蛋白质电泳Mr标准、 限制性内切酶Nde I和Xho I、 T4 DNA连接酶、 Ex Taq DNA聚合酶、 dNTP及PMD19T simple vector试剂盒购自大连宝生物工程有限公司; DNA凝胶回收试剂盒及质粒提取试剂盒购自北京赛百胜公司; TRIzol、 Ⅰ型胶原酶为Invitrogen公司产品; AMV逆转录酶为Promega公司产品; His·Tag融合蛋白亲和纯化试剂盒为Novegen公