浅谈哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响.docVIP

　　浅谈哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响 【论文摘要】研究新型雌激素——哌嗪雌酚酮（PE）对去卵巢骨质疏松小鼠骨代谢及子宫的影响。方法 将60只昆明种小鼠，体重30～35 g，随机分6组，正常对照组，去卵巢模型组(Ovx组)，Ovx+PE 0.5 mg/kg组，Ovx+PE 1.0 mg/kg组，Ovx+PE 2.0 mg/kg组，Ovx+雌酚酮（E）0.71 mg/kg组。去卵巢后连续灌胃给药42 d，处死小鼠后行骨代谢相关指标检测、骨组织胶原染色及子宫病理学检查。结果 PE能预防去卵巢小鼠的骨丢失，高剂量组有统计学意义（Plt;0.05），与模型组比较，中、高剂量组能够显著的提高去卵巢小鼠骨内羟脯氨酸的含量(Plt;0.01,Plt;0.05)；对单位骨重骨钙、骨磷含量无明显影响；与雌酚酮组比较，对骨质疏松小鼠子宫的作用较弱。结论 PE主要是通过提高骨组织胶原的含量维持骨量，对子宫表现出弱刺激作用。 【论文关键词】 哌嗪雌酚酮；骨质疏松；卵巢；子宫 　　绝经后妇女骨质疏松的发病率为50%，其病因主要是绝经后卵巢功能减退、雌激素水平降低引起骨质丢失。雌激素替代疗法(ERT)是防治绝经后骨质疏松最传统、最经典的方案〔1，2〕。然而，长期应用雌激素会增加乳腺癌和子宫内膜癌的风险。因此，寻找选择性高、副作用小的防治骨质疏松药物，成为目前新药研发的热点之一。哌嗪雌酚酮（PE）是一种新的雌激素衍生物〔3〕，既往采用骨形态计量学方法证实了其对大鼠骨丢失的预防作用〔4〕。本实验以骨质疏松小鼠为动物模型，通过对骨基质的分析及骨胶原排布的影响探讨PE对绝经后骨质疏松防治的疗效。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 　　雌性昆明种（KM）小鼠60只（本院动物中心提供），体重30～35 g，将小鼠随机分成6组：正常对照组(Sham组，5‰羧甲基纤维素钠)、去卵巢模型组（Ovx组，5‰羧甲基纤维素钠）、去卵巢+PE低(PEL，Ovx+PE 0.5 mg/kg)、中(PEM，Ovx+PE 1.0 mg/kg)、高剂量组(PEH，Ovx+PE 2.0 mg/kg)和去卵巢+雌酚酮组(E组，Ovx+E 0.71 mg/kg)。对应组分别连续灌胃给药42 d，右心室采血，处死。 　　1.2 实验药品及试剂 　　PE（纯品），由四川大学华西药学院提供； 5‰羧甲基纤维素钠购于上海化学试剂厂；羟脯氨酸（Hyp）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；Direct Red 80购于Sigma公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 骨组织参数的测定 　　1.3.1.1 股骨湿重（Bl安瓿瓶中加入6 mol/L HCl 5 ml，乙炔火烧安瓿瓶口密封后置于烤箱中，108℃恒温消化24 h后取出过滤，取滤液，然后将滤液分成两份，一份以1∶10稀释后用ICP(电感耦合等离子体直读光谱仪)测定微量元素的含量，根据标准品含量及样品稀释倍数计算出骨中Ca2+、P的含量；另一份滤液以1∶10稀释，调pH值至7.0～7.4后，按照Hyp测定试剂盒方法用UV752紫外分光光度计测定样品中Hyp吸光度，计算样品中Hyp含量。 　　1.3.2 骨胶原形态学观察〔5〕 　　脱钙骨制片：取右侧股骨，多聚甲醛液中固定72 h后，置于15%EDTA脱钙液中脱钙4 组织，然后经过常规梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡、包埋，修整蜡块后切片。子宫采用横切面连续切片，切片厚度均为4 μm。HE染色步骤染色，中性树胶封片。在光学显微镜下观察不同组的子宫组织的变化。 　　1.4 统计学方法 　　数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件分析，数据经正态性和方差齐性检验后，采用单因素方差分析(one组比较，Ovx组BWW、BDW明显降低（Plt;0.05），Hyp含量减少，有统计学意义（Plt;0.01），而单位骨的Hyp、Ca、P的含量则无明显变化；PEH组及E组的BDW、BWW增加明显，具有统计学意义。 　　2.1.2 E组的效应 　　与Ovx组比较，E组的骨重量和Hyp的含量增加，但对单位骨重的相关骨成分变化不明显，不具备统计学意义；虽能增加P、Ca的含量也未表现出统计学意义。 2.1.3 PE对骨质疏松小鼠的作用 　　与Ovx组比较，PE能增加骨重量，但以PEH组具有统计学意义，股骨中Hyp含量增加明显，其中以PEM组作用最为显著（Plt;0.01）。但单位骨重的Hyp、Ca、P变化不明显。 　　2.2 股骨形态学观察结果 　　偏振光下可见Ovx组胶原纤维断裂、变短、稀疏，排列紊乱，呈现出淡红或黄色。胶原染色也呈现出较强烈的红色折光，纤维连续，排列规律。PEM组骨基质胶原纤维呈现强烈的红色双折光，纤维连续、粗大，连接紧密，排列规律。见图1。 　　2.3