HPLC实验1浅析.pptVIP

HPLC分析实验 色谱分析实验 ——原理及应用技术 实验目的 通过实验，学习色谱分析的基本原理及仪器的基本使用方法，了解计算机联机处理分析数据的过程。 了解并学会色谱定量方法，比较不同方法的优缺点。 色谱过程：在有互不相溶的两相——流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配的过程。 由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离。 色谱分析法的实质：不同溶质分子由于结构的不同而与流动相及固定相的相互作用力不同，从而引起在色谱柱内运行过程中作用机理的差异。经过柱内多次作用的叠加后在宏观上引起其在柱内停留时间（保留时间）的差异，形成事实上的分离。 分配色谱概述 反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离 洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱 常用的流动相： 有机溶剂如甲醇、乙腈，水 应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法 常用固定相： 碳十八、碳八、胺基等基团 反相色谱固定相多为键合相? 本实验分离机理：咖啡因和苯甲酸的结构不同， 流动相:缓冲液:甲醇=60%:40% 缓冲液: pH=3.0 or pH=4.5? 化合物在不同酸度介质中有不同的解离度，使其在色谱分离过程中的作用有区别 原则:分离度(R1.5)及分析时间(越短越好) 结论