红细胞计数精要.pptVIP

实验一、红细胞计数 临床检验诊断学教研室 一、目的 掌握显微镜红细胞计数的原理及操作方法。 二、原理 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数。 1.0mm 三、器材 试管、试管架、加样枪、微量吸管、胶吸头、干脱脂棉、改良计数板、血盖片、显微镜 四、试剂 生理盐水 五、标本 EDTA盐抗凝血 微量吸管的使用 1.准备吸管及试管： 将乳胶吸头套在微量吸管上，注意两者连接处不应不漏气。 2.加稀释液： 取试管一支，加2ml的生理盐水。 3.持管吸血：右手拇指和中指夹住吸管与吸头交接处，示指盖住吸头小孔。三指轻微用力，排除适量的气体使管内形成负压。将管尖插入抗凝血，三指慢慢松开，吸取抗凝血达到所需血量。 4.拭净余血：用纱布沿管口方向拭净余血，并检查血量是否达到刻度线。 5.释放血液：将吸管插入含生理盐水的试管底部，慢慢排除吸管内的血液，再用上清液冲洗管内余血3次，最后将管内残余液体完全排净。 普通光学显微镜的使用 （1）打开电源开关，旋转光源调节旋钮使光强适中； （2）打开夹片器，放好标本（计数板）； （3）将低倍镜头至于标本上方，从侧面观察，旋转显微镜的粗调，使样品尽可能接近物镜； （4）通过右目镜观察标本，慢慢旋转粗调使载物台下降，粗调聚焦后再用微调做精细调焦，调节光瞳间距调节把手，双目可以观察到一个单一的像； （5）握住物镜转换器转动，选用所需放大倍数的物镜10倍或40倍。 （6）观察并记录。 六、操 作 1. 准备计数板：采用推压法从计数板下缘向前平推血盖片，将其盖在计数池上。 2. 加稀释液: 取小试管1支，加稀释液2.0ml。 3. 加血：用微量吸管吸取抗凝血10μl，擦去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。 六、操 作 4. 充池：用微量吸管将红细胞悬液充入计数池， 室温下平放3～5分钟后于显微镜下计数。 5. 计数：用高倍镜依次计数中央大方格内4角 和正中5个中方格内的红细胞数。 * 计数原则 黑色点为计数点，白色点为不计数点 六、操 作 6. 计算：RBC/L=N/5×25×10×201×106 ≈N×1010 =N/100×1012 7. 报告方式：X.XX×1012/L。 七、注意事项 1. 清洁干燥：保证计数板和血盖片清洁干燥。 2. 准确：稀释液和血液加样量要准确。 3. 混匀：加血前和充池前要充分混匀。 4. 充池：一次性完成充池，不能产生满溢、气泡或充池不足的现象，否则应重新充池。 七、注意事项 5. 计数：红细胞在计数池中若分布不均，每个中方格之间相差超过20个以上时要重新充池计数。正常参考区间范围内，2次红细胞计数相差不得超过5%。 6. 计数原则：压线细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。