红松愈伤组织诱导的初步研究.pdf

第34卷第3期 林 业 科 技 V01．34No．3 ：!皇!：!堑i旦：； !坌里曼篁!垦圣!篁!墅垒篁兰垒!坚篓坚垒垒兰望垒兰 ：：坠!! !里垒!： ：：一 文章编号：1001—9499(2009)03-0001—04 红松愈伤组织诱导的初步研究 曹 焱1’2 沈海龙1 李 京2 邢亚娟3+ (1．东北林业大学，黑龙江啥尔滨150040；2．黑龙江林业科学研究所，啥尔滨150081；3．黑龙江大学。哈尔滨LS00∞) 摘要：以未成熟和成熟舍子胚为外植体进行了红松愈伤组织的诱导，其结果表明，成熟胚的诱导效果明显好于 幼胚；鉴于诱导产生褐化的主要部位来自胚根，所以外植体应选用子叶、胚轴或去除胚根的胚；诱导培养基采 用LM+2，4一D 2．0mg／L+6一BA0．5mg／L可诱导出较大量Ⅱ型有效愈伤组织，经组织学观察，可见早期原胚 团，疑似胚性愈伤组织；继代增殖培养基可采用LM+2．4一D0．5mg／L+6一BA0．2mg／L。 关键词：红松；愈伤组织诱导；合子胚外植体 中图分类号：S791．247。S722．3+5文献标识码：A 1．2．2外植体的制备 红松(P／nuakoraien．sis)是我国温带阔叶红松 林的建群树种，是珍贵优质用材和坚果经济林建 成熟种子灭菌后剥去胚乳，分割胚为子叶、 设树种，具有重要生态价值和经济价值。愈伤组 胚轴、胚根以及完整胚做为外植体。 织培养是不定芽和体细胞胚胎发生途径进行植株 未成熟种子灭菌后，分别做如下处理：6月 再生的重要基础，同时愈伤组织还是原生质体培 未成形胚，胚乳透明，中心纵切；7月子叶期， 养和转基因的良好材料来源。红松愈伤组织培养 胚轴及胚根透明柔软，剥离出幼胚；8月与9月 对红松离体再生和遗传转化研究具有重要意义， 种子近于成熟，取完整幼胚。 但有关方面的研究仅见少数几例【lt2J。为此，我们 1．2．3诱导培养基及激素组合的筛选 进行了红松愈伤组织培养条件和方法的研究，现 将前期试验筛选出的初始阶段诱导率较高的 将初步结果报道如下。 LM‘引、DCR‘61、BM[71培养基作为基本培养基， 1 材料和方法 5．8。在此基础上往各培养基内添加不同浓度的激 1．1材料 素(表1)，并以未添加激素的培养基为对照。 红松成熟种子采于2007年10月，不同成熟 表1 诱导培养基殛激素组合 度种子分别采于2008年6、7、8、9月，采种地 m昏，L 点为黑龙江省哈尔滨市阿城区小岭林场的红松人 工林，树龄30年左右，现已结实7年。采种后置 于4℃冰箱低温保存2周后进行接种。 1．2方法 1．2．1材料灭菌 成熟种子去除坚硬外种皮后灭菌，未成熟种子 携带外种皮一起灭菌。由于红松种子灭菌较为困 1．2．4愈伤组织增殖激素组合的筛选 难，所以此次试验采用综合灭菌方法，即先用洗涤 以LM做为增殖培养基，通过添加各种激素 组合(KT为激动素；TDZ为苯基噻二唑脲；ZT 剂清洗种子约5rain，然后用浓度5．25％的次氯酸 钠溶液浸泡10rain，再用75％的酒精处理30s，最为玉米索)，以期筛选出适宜增殖培养的激素组 后用0．1％的升汞溶液灭菌，升汞溶液灭菌共设4