曲古抑菌素A对前列腺癌LCP细胞雄激素受体的清除作用Na.pdf

· l249 · 【{】闰临床药理学 0治疗学 ◇研究原著 ◇ 中用药理学会主办 【 M-一l2o6／K，lssN l009—25ol http：／／n ¨ DlngChinanet 2005N0v：10(1I)：I249—1252 曲古抑菌素A对前列腺癌 LNCaP细胞雄激素受体的清除作用 孙圣坤 一·，刘 兵 ，李秀森 ·，侯春梅 ·，洪宝发 ，于晓皿 军事医学科学院基础医学研究所，北京 100850；!解放军总医院泌尿外科，北京 100853 摘要 目的：研究组蛋 白去 乙酰化酶抑制剂曲古抑 因表达失控(如某些抑癌基因的转录抑制)，从而导 菌素A(trichostatinA，TSA)对前列腺癌细胞的抑制作 致癌症 的发生 。以曲古抑菌素 A(trichostatinA， 用机理 ：方法 ：四甲基偶唑氮蓝 (MT1’)检测 药物对 TSA)为代表的HDAC抑制剂，通过抑制HDAC，阻断 肿瘤细胞增殖的影响；Hochest33342染色观察细胞 或逆转 由于HDAC异常募集而导致的基因表达抑 凋亡的形态学变化 ；Westem 印迹分析雄激素受体 制，目前成为抗肿瘤研究中非常有前途 的药物。 (AR)蛋白的表达；反转录 PCR检测 AR转录水平的 TSA属氧肟酸类 HDAC抑制剂，新近研究观察到 变化 ：结果： A在较低浓度即能有效抑制 LNCaP TSA体外对前列腺癌细胞系具有抑制效应 !：本实 细胞的增殖，EC．为 125．9nmol·L ，并诱导肿瘤细 验通过研究TSA对雄激素受体 (AR)信号通路的影 胞凋亡：药物处理后 细胞周期依赖性 蛋 白激酶抑 制 响，探讨其对前列腺癌LN( 细胞系的抑制作用机制 剂p21表达增高，AR呈时间及剂量依赖性被清 除一 1 材料和方法 TSA对 AR的清除是发生在蛋 白水平的降解 ，而不 影响其转录 结论 ：TSA能够清除对细胞生长具有 1．1 主要试剂 TSA购于 Sigma公司，溶于二 甲基 重要作用的AR细胞信号通路 ，从而对前列腺癌 LN— 亚砜 ，一7O℃保存；Mr丌(四甲基偶唑氮蓝)、hoechest CaP细胞发挥抑制作用 33342、Trizol购于 Simga公司；所应用抗体 ：抗 AR多 关键词 前列腺肿瘤；受体：雄激素；细胞凋亡；组 克隆抗体 、辣根过氧化物酶标记的抗鼠、抗兔二抗均 蛋白脱 乙酰基酶；组蛋白去 乙酰化酶抑制剂 ；曲古抑 购于CellSignal公司，抗 p21抗体购于 SantaCruz公 菌素 A；细胞信号通路 司；BCA 蛋 白定量 试剂 盒 、化学 发光 底物 购于 PIERCE公司；RT—PCR试剂盒购于Takara公司，引物 中图分类号 ：R979．1 由上海博亚生物技术公司合成。 文献标识码 ：A 1．2 细胞系及细胞培养 LNCaP细胞为本实验