免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用.pdfVIP

免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用 1 2 2 2 2 周盛华 崔尚金* 戚亭 岳丰雄 张超范 （1.东北农业大学动物医学院 哈尔滨 150030） （2.哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室 哈尔滨 150001） E-mail ：zhoushenghua2005@163.com 摘要：胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法，非常 适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记 技术以及目前在养猪业上的应用情况。 关键词：胶体金；试纸条；猪病 中国分类号：R730.45 文献标识码： 1.引言 免疫胶体金技术（Immune Colloidal gold technique, ICG ）就是免疫金标记技术 （immune-gold labelling technique ）。自 1971 年Faulk与Taylor[1]创立胶体金标记技术以来， 胶体金被引入免疫化学中，成为继荧光标记、酶标记和放射性免疫标记之后的一种新型的免 疫 标 记 技 术 。 免 疫 胶 体 金 标 记 技 术 主 要 包 括 ： 胶 体 金 免 疫 层 析 诊 断 法 （Gold-Immunochromatography Assay, GICA ）和免疫胶体金渗滤法（Dot-immunogold [2] 。其中层析诊断法（即试纸条法）是在免疫胶体金渗滤法基础上发 filtration assay, DIGF ） 展而来的，近年来已在生物医学各领域得到了日益广泛的应用，尤其是在医学临床检验中的 应用，如早孕、乙肝、寄生虫、性病和病毒细菌病的检测[3] 。该方法操作简单、特异性强， [4] 。而动物医学临 并可在 15min以内很直观地判断出待测物的有无，大大提高了检测的速度 床诊断方面的应用起步较晚，最近几年才有报道。免疫胶体金层析技术现已成为当今最快速、 敏感的免疫学检测技术之一，特别适合于广大基层兽医人员以及大批量检测和大面积普查 等，因此该技术具有巨大的发展潜力和应用前景[5] 。现就该技术的原理、方法、应用和发展 前景做一简要综述。 2. 免疫层析快速诊断试纸条的基本原理及制备 2.1 基本原理 免疫层析快速诊断试纸条是利用抗原抗体反应，在硝酸纤维素膜上预先固定好特异性抗 原（或抗体）和第二抗体两种捕获剂，分别作为检测带（Test 1ine ）和质控带（Control 1ine ） [6] 。反应物是固定于胶体金结合垫上并标记了抗待测物抗体的胶体金颗粒。将样品液滴加在 试纸条的加样垫上，样品液先溶解固定在结合垫上的胶体金，并与之反应形成复合物。当溶 液在毛细管作用下到达抗原区域（T带）时，T带上的特异性抗原与待测物和胶体金复合物 再次发生特异性结合，而被截留在T带上，并显示出颜色[7,8] 。因此，可以根据试纸条T带的 颜色深浅或有无来判断样品中是否含有待测物。该方法还是进行定性或半定量检测的一种有 [9,10,11] 效途径 。 2.2 胶体金的制备方法 胶体金溶液的制备有许多种方法，其中最常用的是化学还原法，基本原理是向一定浓度 的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、 过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等[12,13,14] 。本文主要介绍采用柠檬酸三钠 还原法制备40 nm胶体金，步骤如下。 2.2.1 玻璃器皿的清洁 - 1 - 先用自来水把制备胶体金的所有玻璃器皿冲洗干净，用清洁液（重铬酸钾1000g，加入