生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂对病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子影响的研究.docVIP

　　生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂对病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子影响的研究 作者：郭亚春，邢恩鸿，赵清策，黄群，石丽 【摘要】 目的研究生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂(以下简称生黄合剂)对病毒性心肌炎（VMC）小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，探讨其 治疗 VMC的免疫调节机制。方法Balb/c小鼠170只，随机分为正常组，生黄合剂治疗组、生脉饮组、抗病毒口服液组、病毒对照组。除正常组外其它各组腹腔接种柯萨奇病毒B组3型（CVB3）建立VMC模型，药物治疗组均灌胃给药，0.2 ml/10g，2次/d。给药10 d后，应用ELISA 检测血清中TNF-α的浓度，同时应用RT-PCR观测心脏组织中细胞因子TNF-α mRNA表达情况。结果应用生黄合剂治疗VMC后，血清中TNF-α的浓度可显著降低，心脏组织中TNF-α mRNA表达显著下降。结论生黄合剂通过调节细胞因子TNF-α mRNA的水平来发挥其对VMC有益的免疫调节作用。 【关键词】 病毒性心肌炎； 黄芩茎叶总黄酮； 肿瘤坏死因子； 细胞因子； 免疫调节 　病毒性心肌炎（VMC）的主要发病机制是病毒直接损伤作用和机体的免疫反应作用。许多学者认为在VMC的发病过程中，早期的发病机理和病毒的直接损伤有关，而急性期和机体免疫损伤有关。许多研究表明细胞因子尤其是TNF与VMC密切相关。为此，我们观察了生脉饮与黄芩茎叶总黄酮联用（以下简称生黄合剂）对VMC小鼠细胞因子尤其是肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，旨在探讨生黄合剂对VMC的免疫调节机制。 　 　1 材料 　　萨奇病毒B组Nancy 株（承德医学院中药研究所惠赠）。在Hele细胞上扩增后半数组织感染量（TCID50）为10-5.8。雄性Balb/c小鼠，170只，［体质量16～18g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号: SCXX（京）2002-2003］。总黄酮：（黄芩茎叶大孔吸附树脂提取物，承德医学院中药研究所提供）；生脉饮（北京同仁堂科技 发展 股份有限公司制药厂，国药准字：；抗病毒口服液（河南慷鑫药业有限公司，国药准字：。TNF-α:ELISA试剂盒（美国Biosouce公司）TRIZOL Reagent 、M-MLVReverse Transcriptase（Invitrogen）。Pfu DNA polymerase（北京天为时代科技有限公司）。引物β-actin:上游5gt;CCC CAA GGC CAA CCG TGA Alt;3，下游5gt;CGG AAT CGC TCG TTG CCA AT GTlt;3，扩增产物为435bp; TNF-α:上游5gt; TGT CTA CTC CCA GGT TCT C lt;3，下游5gt; CCC ATT CCC TTCACAGAGC lt;3，扩增产物为311 bp由天津灏洋公司设计，上海生工合成。 　　 2 方法 　　2.1 VMC模型制作体质量16～18 g的雄性Balb/c小鼠，随机分为生黄合剂治疗组（包括AⅠ组即生黄合剂高剂量组，AⅡ组即生黄合剂低剂量组），生脉饮组（B组），抗病毒口服液组（C组），病毒对照组（D组），每组30只。每组腹腔注射800TCID50的CVB3 0.1ml，制作VMC模型。另取20只正常小鼠作为正常组（E组），不造模。 　　2.2 治疗方法于接种病毒1 h后AⅠ组予总黄酮200 mg/kg，生脉饮10 ml/kg；AⅡ组予总黄酮50 mg/kg、生脉饮2.5 ml/kg；生脉饮组予10 ml/kg生脉饮和抗病毒口服液组予10 ml/kg抗病毒口服液，日两次灌胃。病毒对照组与正常组予等剂量的生理盐水灌胃。 　　2.3 检测方法连续给药10 d，每组随机取10只小鼠，常规无菌取血后，颈椎脱位处死小鼠，摘取心脏，心底部用光镜观察心肌细胞损伤情况并 计算 心肌病理积分。用双抗体夹心ELISA法测定小鼠血清TNF-α水平。心尖部心脏组织采用RT-PCR方法，测定细胞因子TNF-α mRNA表达情况。应用Trizol核酸提取试剂一步法提取心脏组织总RNA，RT严格按照试剂盒说明书操作，分别扩增28、22循环， PCR产物予1%的琼脂糖凝胶电泳，利用凝胶成像及分析系统分析各DNA条带灰度值,做半定量分析。 　　2.4 统计学方法采用SPSS11.0统计软件，结果均以 ±s表示，行t检验。检验水准α=0.05。 　 　3 结果 　　动物的一般情况 接种CVB3后第3天，病毒对照组部分小鼠出现明显的活动减少，精神萎靡，毛无光泽，蜷缩，对刺激反应迟钝，进食、水减少，第5天开始死亡，死亡高峰主要集中在接种病毒后8～10 d，10 d死亡14只。 治疗 组死亡时间推迟到第