用猪蓝耳病弱毒疫苗治疗普通型猪蓝耳病效果观察.docVIP

　　用猪蓝耳病弱毒疫苗治疗普通型猪蓝耳病效果观察 用猪蓝耳病弱毒疫苗治疗普通型猪蓝耳病效果观察 猪蓝耳病是一种发病率和死亡率高、传播快、主要侵害猪的繁殖和呼吸系统的病毒性传染病。主要表现为母猪繁殖障碍、仔猪断奶前高死亡率、育成猪的呼吸道疾病三大症状。多表现为高热（４１℃以上）、精神沉郁、厌食、呼吸困难，耳朵、乳头、外阴、腹部、尾部发绀，以耳尖最为常见。怀孕母猪流产或早产，.L.产木乃伊、死胎和病弱仔猪，死产率可达８０％～１００％。仔猪特别是乳仔猪死亡率很高，可达８０％以上。大多数新生仔猪出现呼吸困难（腹式呼吸）、肌肉震颤、后躯麻痹、共济失调、打喷嚏、嗜睡、精神沉郁、食欲不振等症状。育肥猪体温可升高至４１℃左右，食欲明显减少或废绝，多数全身发红，呼吸加快，咳嗽明显，个别病猪流少量黏性鼻液［１］。该病大多混合感染猪瘟（ＨＣＶ）、猪流感病毒（ＳＩＶ）、伪狂犬病病毒（ＡＤＶ）、猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－ＩＩ）和猪胸膜肺炎（ＡＰＰ）、猪链球菌、副猪嗜血杆菌（ＨＰ）、多杀性巴氏杆菌（ＰＭ）、猪支原体肺炎（ＭＨ）、弓形体、附红细胞体、猪霍乱沙门氏菌（ＳＣ）等，无继发感染的病猪死亡率较低。 　　 　　２０１０年５月以来，在宜昌市先后对８起普通型猪蓝耳病疫情进行了治疗，共治疗１ ４９６头，治愈１ ３１９头，取得了很好的效果。现将治疗情况总结如下。 　　１材料与方法 　　１．１蓝耳病的诊断 　　２０１０年５月以来，先后对宜昌市出现有猪蓝耳病临床症状的８例病猪血样进行了ＰＣＲ诊断。 　　１．１．１试验材料 　　猪全血：疑似症状猪全血共２４份（每例３份）。 　　引物：参照方六荣［２］、李彬等［３］的方法设计一对特异性引物。上游引物（Ｎｓｐ２Ｆ）序列为５prime;－ＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＧＴＣＣＣ－３prime;，下游引物（Ｎｓｐ２Ｒ）序列为５prime;－ＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＧＣＧ－３prime;。ＰＲＲＳＶ变异株和经典毒株预期扩增产物长度分别为４１８ｂｐ和５０８ｂｐ。 　　主要试剂：ＲＮＡ提取试剂盒购自美国ＯＭＥＧＡ公司；ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒购自大连宝生物公司；低分子量蛋白质Ｍａｒｋｅｒ、琼脂糖购自ＯＸＯＩＤ公司。 　　１．１．２试验方法 　　病毒总ＲＮＡ的提取：采集的全血分离后收集上清，ＲＮＡ病毒的抽提按试剂盒说明书进行。 　　反转录反应：按ＴａＫａＲａ ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ ３．０说明书进行。反转录产物直接用于ＰＣＲ反应模板或－２０℃保存。 　　ＰＣＲ反应：反转录产物１０ mu;Ｌ，５ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ １０．０ mu;Ｌ，上下游引物各０．５ mu;Ｌ（２０ mu;ｍｏｌ／Ｌ），ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ ＨＳ ０．２５ mu;Ｌ（５ Ｕ／mu;Ｌ），用灭菌双蒸水补充总体积至５０ mu;Ｌ。ＰＣＲ 反应条件为：９４ ℃变性５ ｍｉｎ；进入ＰＣＲ循环，９４ ℃ １ ｍｉｎ，５７ ℃ １ ｍｉｎ，７２ ℃ １ ｍｉｎ，３５次循环后，７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ，４ ℃保存。 　　ＰＣＲ产物电泳检测：ＰＣＲ产物在１％琼脂糖凝胶上进行电泳，当溴酚蓝电泳至适当位置，在长波紫外灯／凝胶成像系统下观察或拍照。 １．２分组治疗 　　１．２．１疫苗猪蓝耳病弱毒疫苗为武汉中博生物股份有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（ＪＸＡ１－Ｒ株）。 　　１．２．２治疗方法对确认发生普通型猪蓝耳病的猪每头.L.注射猪蓝耳病弱毒疫苗1次（１０头份）。同时每天注射林可霉素防止继发感染，饮水中添加口服补液盐，以提供能量。 　　１．２．３分组治疗对４例（８９７头）５０ ｋｇ以上确诊为普通型猪蓝耳病病猪按以上方法治疗，１０ ｄ后观察结果；对３例（５３５头）３０～５０ ｋｇ确诊为普通型猪蓝耳病病猪按以上方法治疗，１０ ｄ后观察结果；对１例（６４头）３０ ｋｇ以下确诊为普通型猪蓝耳病病猪按以上方法治疗，１０ ｄ后观察结果；对照组１６头（每病例２头）只注射林可霉素和饮水中添加口服补液盐，1周后观察结果。 　　１．３其他防控措施 　　１．３．１无害化处理病死猪尸体严格要求各养殖场及时采用深埋、焚烧等无害化方法处理死胎、死猪，严格控制病猪的流动，防止疫情扩散蔓延。 　　１．３．２严格消毒加强环境消毒，实行带体消毒，保持饲养用具的清洁，对污染的所有地方进行严格消毒。隔离病猪，封锁疫区，确保疫情不外传。 　　１．３．３加强饲养管理加强饲养环境管理，降低饲养密度，加强通风、防暑降温，改善猪舍环境。调整日粮，对病猪饲喂高能量饲料及青绿饲料，提高饲料中维生素及矿物质含量。 　　１．３．４加强对其他病的诊治蓝耳疫情中常混有猪瘟等其他疫病，因此必须加强对其他疫病的免疫工作，减少混合感染，减少死亡。 　　２结果与分析 　　２．１Ｐ