番茄红素对寰枢椎失稳老年小鼠脑保护作用的研究.docVIP

　　番茄红素对寰枢椎失稳老年小鼠脑保护作用的研究 作者：范文静 李林 朱彤彤 郭亚雄 赵丽娟 【摘要】 目的 观察番茄红素(Lycopene)对寰枢椎失稳老年小鼠脑的保护作用。方法 小鼠寰枢椎周围注射30%乳酸溶液30 μl/次,1次/g/kg连续1次/d灌胃观察100 d,水迷宫测试小鼠记忆能力;酶联免疫分析法(ELISA)测定脑组织TNFα、IL1β、IL6含量;免疫组织化学法(SABC)观察海马CA1区蛋白β淀粉样蛋白(Aβ)的表达。结果 与模型组比较，Lycopene高剂量组小鼠，水迷宫实验错误次数显著减少(Plt;0.01);脑组织TNFα、IL1β、IL6含量降低显著(Plt;0.01，Plt;0.01，Plt;0.05);脑海马CA1区Aβ表达介于正常对照组和模型组之间。结论 Lycopene对寰枢椎长期乳酸堆积所致老年小鼠记忆能力减退具有一定的改善作用，其机制与Lycopene 降低脑组织TNFα、IL1β、IL6含量及抑制Aβ蛋白的生成有关。 【关键词】 番茄红素;学习记忆;寰枢椎;白细胞介素，细胞因子;β淀粉样蛋白 番茄红素(Lycopene)又名茄红素，是类胡萝卜素的一种，广泛存在于红色蔬菜与水果中，因最早发现于番茄中而得名。国内外研究发现，Lycopene具有多种重要的生物学作用，如抗氧化、清除自由基、预防肿瘤及调节机体免疫功能、抗衰老等作用〔1〕。Lycopene是天然类胡萝卜素中最有效的单线态氧清除剂，其作用是目前常用抗氧化剂β2胡萝卜素的2倍、维生素E的100倍〔2〕。此外,Lycopene还可诱导某些内源性抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的活性〔3〕。本实验通过破坏颈椎周围韧带引起小鼠颈椎稳定性异常，导致小鼠记忆能力下降和脑组织损伤，观察番茄红素对脑组织损伤的康复 治疗 作用。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料 10月龄ICR小鼠，体重(40±2)g，清洁级，由吉林大学实验动物中心提供;番茄红素(Lycopene)购于西安大恒制药有限责任公司;白细胞介素1β(IL1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL6)检测试剂盒购于上海卓康生物科技有限公司;免疫组化SABC染色试剂盒及淀粉样蛋白(Aβ)140抗体，购于武汉博士德生物有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 实验分组 10月龄ICR小鼠32只，雌雄各半，随机分为4组:正常对照组、模型组、Lycopene高、低剂量组,每组8只;5月龄ICR小鼠8只，雌雄各半，作为非老年对照组。 　　1.2.2 模型制备 除对照组，其余所有小鼠第1,2颈椎关节处注射30%乳酸溶液30 μl/次，1次/g/kg剂量灌胃，食用色拉油稀释，1次/d，连续给药100 d;对照组和模型组给予等体积色拉油，灌胃。 　　1.2.3 水迷宫实验 水迷宫由黑色有机玻璃板制成，水深18 cm，水温(23±1)℃，分成A、B、C、D区。终点区有一高出水平的安全平台。各区至终点区为一阶段训练，每一阶段训练3次。每次到达平台上休息30 s，再行下次实验。记录小鼠从起点A区游至终点台阶处的时间为游全程时间,其进入盲端次数为错误次数;24 h复测，作为记忆成绩，若动物120 s内未游到终点则以120 s 计算 〔5〕。 　　1.2.4 脑组织TNFα、IL1β、IL6含量测定 末次给药次日断头处死小鼠，冰盘上迅速分离大脑，取一侧大脑制备组织匀浆，4℃、3 000 r/min离心15 min，取上清液置-30℃保存;采用酶联免疫分析法测定脑组织TNFα、IL1β、IL6含量，按照说明书进行。 　　1.2.5 免疫组化染色 按试剂盒说明书操作，采用SABC法，检测脑海马CA1区神经细胞异常结构蛋白Aβ140表达，光学显微镜下观察，细胞内见棕色颗粒者为阳性细胞。 　　1.3 统计学分析 采用SPSS12.0软件进行单因素方差分析，数据用x±s表示。 　 　2 结 果 　　2.1 水迷宫实验 与正常对照组相比，模型组游全程时间明显延长,错误次数显著增加(Plt;0.05);与模型组比较，Lycopene高剂量组错误次数也明显减少(Plt;0.01)，低剂量组游全程时间和错误次数无显著差异(Pgt;0.05)，见表1。表1 小鼠的水迷宫实验检测结果正常对照组比较:1)Plt;0.05，与模型组比较:2)Plt;0.01 　　2.2 细胞因子检测结果 与正常对照组比较，模型组TNFα、IL1β和IL6含量升高(Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.05);与模型组比较， Lycopene高剂量组小鼠脑组织TNFα、IL1β和IL6含