土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)要点.docVIP

土壤微生物生物量的测定方法 1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器）土壤释放用一定借用根据）从而 1.2 实验仪器 自动总有机碳（TOC）—500,JANPAN）真空烧杯三角瓶聚乙烯离心管滤纸漏斗无乙醇） 2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中 3）工作曲线的配制：用ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、 70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下， 仪器会自带的标曲，一般不用自己做的） 1.4 操作步骤 1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略） 1.4.2 熏蒸 称取）将并）ml烧杯烧杯同时盖上用使氯仿关闭 1.4.2 抽真空处理 熏蒸结束后，打开否则重做））aOH溶液的小烧杯，清洁反复每次每次）同时另称量置于 1.4.4 浸提过滤 从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将ml聚乙烯加入ml 0.5mol/L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，4g土：16ml的硫酸钾溶液，当然这个加入量要根据TOC仪器的进入量决定）300r/min振荡30min，用同时土壤或20℃冷冻保存（但使用前需解冻摇匀）过滤时不要用普通的定性或定量滤纸，以免长久杂质会堵塞仪器的管路，建议使用那种一次性塑料注射器，配一个0.2um的滤头）测定由于不同这里APAN）为例。 1.5 计算 SMBC=(ECCHCL3—ECCK)*TOC仪器的稀释倍数*原来的水土比/0.45 2 土壤微生物生物量氮（茚三酮比色法） 土壤微生物生物氮一般占土壤全氮的2%—7%，是土壤中有机—无机态氮转化的一个重要环节，关于土壤微生物氮的测定常见的熏蒸浸提法有两种，一是全氮测定法，另一个是茚三酮比色法，如下 2.1 基本原理（茚三酮比色法） Amato和Ladd（1988）主要α-氨基酸这两种并发现与其因此人们） 2.2 实验仪器 分光光度计、硬质水浴锅真空干燥烧杯三角瓶聚乙烯料管离心管漏斗无乙醇） 2）0.5mol/L (K2SO4)溶液：称取）g，溶于稀 释ml； pH5.2的乙酸锂（LiOH?H2O）称取LiOH?H2O）g，加 入）ml，加水ml，用%氢氧化钠H至5.2。 4）茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜）ml加入g 水 合?H2O）g还原?2H2O） 5）50%乙醇吸取ml 99%乙醇ml容量瓶用 6）1mol/L的硫酸铵[(NH4)2SO4]标准储存液：称取4.7167g分析纯h）溶于mol/L 硫酸钾溶液中，并用ml， 摇匀 7）0.1mol/L 的硫酸铵[(NH4)2SO4]标准液：吸取10ml 1mol/L的硫酸铵标准 储存液于100ml容量瓶中用mol/L硫酸钾溶液定容至100ml，摇匀此 8）工作曲线的制备：分别吸取0.00ml、ml、ml、、、mol/L的硫酸铵标准液于100ml容量瓶用mol/L硫酸钾溶液 定容至100ml，摇匀其mol/L、0.25mol/L、、、 、、 2.4 操作步骤 2.4.1 土壤的前处理（和1.4.1一样） 2.4.2 熏蒸（和1.4.2一样） 2.4.3抽真空处理（和1.4.3一样） 2.4.4 浸提过滤 从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将ml聚乙烯加入ml 0.5mol/L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为2g，即，2g土：8ml的硫酸钾溶液）300r/min振荡30min，用同时土壤或20℃冷冻保存（但使用前需解冻摇匀）过滤时不要用普通的定性或定量滤纸，以免长久杂质会堵塞仪器的管路，建议使用那种一次性塑料注射器，配一个0.2um的滤头ml样品分别ml的加入ml茚三酮涡旋置于在迅速）加入ml稀释液%乙醇）摇匀 2.4.4 浸提过滤 从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将ml聚乙烯加入ml 0.5mol/L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，2g土：16ml的硫酸钾溶液）300r/min振荡30min，用同时土壤或20℃冷冻保存（但使用前需解冻摇匀）过滤时不要用普通的定性或定量滤纸，以免长久杂质会堵塞仪器的管路，建议使用那种一次性塑料注射器，配一个0.2um的滤头）可mol/LNaHCO3等提取剂提取，而且能够于是--无机磷h）采用mol/LNaHCO3溶液提取被杀死的土壤微生物生物量磷，在）可用根据p，这个系数很重要，因为如果没有这个系数，所测定的结果就是土壤的速效磷，但是土壤微生物熏蒸后释放的磷大多数是无机磷，而速效磷包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，有的土壤中还包括某些沉淀态磷，因