石蒜的指纹图谱及其生物碱的含量测定研究.docVIP

　　石蒜的指纹图谱及其生物碱的含量测定研究 作者：贾晓东 姚欣梅 陈为民 管志建 徐霞 冯煦 【摘要】 目的研究石蒜的指纹图谱。方法高效液相色谱法，紫外检测器(VethodsHPLC and acetonitrile-methol-l/min. ResultsThe RSD of relative retention time and peak area of coexist peaks met to method requirement during the investigation of precision，stability and repeatibity trials．All of the 10 batches of samples shared a high similarity. At the same time, the contents of three alkaloids in 10 batch samples and other samples ined. ConclusionThe fingerprint of Lycoris radiate（L′Her.）Herb. can be used as thEir characteristic chromatography fingerprint of Shisuan． Key ine； Fingerprint； HPLC 石蒜Lycoris radiate（L′Her.）Herb.为石蒜科石蒜属植物，又名龙爪花、红花石蒜等。鳞茎含有多种生物碱，药理实验证明其中的生物碱类具有多种活性。从石蒜中提取的加兰他敏已作为药物在包括美国、加拿大等23个国家批准和上市，用于 治疗 阿尔茨海默病(简称AD)［1］。加兰他敏、力可拉敏也已在临床用于治疗小儿麻痹后遗症。然而由于石蒜的品种繁多，每种之间成分含量有一定的差异，因此对石蒜建立合适的质量控制方法是很有必要的。国内石蒜的资源主要分布在江苏、浙江及安徽3省，占国内资源种类的80％ 以上［2］。按照国家药品监督管理局2000年颁发的“中药注射剂指纹图谱技术要求”的有关规定［3］，对产于江苏的不同采集地点的10批石蒜建立了HPLC指纹图谱方法。建立其指纹图谱是为了反映其质量情况，为建立稳定、可靠、全面的质量控制方法提供 科学 依据。同时对其中所含的3种生物碱的含量进行了测定。 1 器材 1.1 样品本实验植物样品包括产于江苏的石蒜Lycoris radiate（L′Her.）Herb.10份，产于湖南的石蒜1份， 中国 石蒜、忽地笑、换锦花各1份，其编号、采摘地点及采摘时间等见表1。样品采收后取鳞茎，洗净切小块，在60℃下烘干备用。 1.2 对照品石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏对照品，福建利科生物技术有限公司提供，批号：061210-2，纯度≥98％。 1.3 试剂及仪器乙腈、甲醇：HPLC级；三乙胺：AR级；去离子水。美国Agilent公司1100液相色谱仪，HP Chemstation色谱工作站，紫外检测器（Venex Gemini C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），Gemini预柱。 2 方法 2.1 色谱条件经方法学研究确定色谱条件，流动相A∶水（三乙胺调节pH值至9.0～9.2之间）；流动相B：乙腈；流动相C：甲醇。梯度洗脱程序见表2。柱温40℃；流速1.0 ml/min；检测波长232 nm；进样量10 μl。表1 植物样品的采集情况表2 梯度洗脱程序 2.2 参照物标准液制备精密称取石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏标准品，甲醇定容分别配成0.36，0.34，1.00 mg/ml的原液备用。 2.3 供试液的制备取如上干燥植物样品，粉碎，过40目筛。精密称定6.0 g，置索氏提取器中，加10％的氢氧化钠10 ml混匀润湿，放置15 min。分别用25 ml醋酸乙酯在75℃水浴回流提取3次，第1次提取2 h，后两次均为1 h，合并提取液。过滤，减压蒸干，用少量甲醇溶解洗涤，定容至10 ml，用0.45 μm微孔滤膜滤过后作为供试品溶液。 2.4 稳定性实验取石蒜5号样品供试液，分别在0，4，8，12，24 h检测指纹图。结果各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值基本一致，RSD＜3％，供试品溶液在24 h内稳定，符合指纹图谱技术要求。 2.5 精密度实验取石蒜11号样品供试液，连续进样5次，检测指纹图。比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3％，符合指纹图谱的检测要求。 2.6 重复性实验取石蒜3号样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品，检测指纹图。并分别按上述液相条件测定，对共有峰的相对保留时间和