矿化诱导促进冻存骨髓基质细胞在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原的实验研究.docVIP

　　矿化诱导促进冻存骨髓基质细胞在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原的实验研究 作者：袁芳，李厚轩，金峰，郑瑜谦，闫福华 【摘要】 　　目的 观察矿化诱导培养能否促进冻存骨髓基质细胞（BMSCs）在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原，为牙周组织工程中选择适宜的种子细胞的保存和培养条件提供 参考 。 方法 体外分离培养Beagle犬BMSCs，经冻存12个月后，在矿化诱导培养液（矿化诱导组）或基础培养液（非矿化诱导组）中形成BMSCs胶原膜支架复合物，将矿化诱导培养液处理的单纯胶原膜支架(空白对照组)、2种BMSCs胶原膜复合物分别植入裸鼠背部皮下组织中，术后第4周行组织病 理学 和免疫组织化学观察，分析各组标本中的Ⅰ型胶原形成量。 结果 空白对照组植入胶原膜后，新生胶原分布很少；非矿化诱导组胶原分布明显增多；矿化诱导组中见大量新生的胶原形成。免疫组织化学光密度测量显示，矿化诱导组(0.1963±0.0126)gt;非矿化诱导组(0.1489±0.0037)gt;空白对照组(0.0775±0.0058)（Plt;0.05）。 结论 矿化诱导培养能够促进冻存的BMSCs在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原。 【关键词】 低温保存； 骨髓细胞； Ⅰ型胶原； 牙周组织； 组织免疫组织化学 　　ABSTRACT: Objective To explore the effects of osteoinductive culture on the synthesis of type Ⅰ collagen by bone marroal cells (BMSCs) in nude mice. Methods BMSCs from beagle dogs onths. Recovered BMSCs edium. Osteoinductive conditioned collagen scaffold alone, osteoinduced and noninduced BMSCsscaffold plex planted into the subcutaneous tissues of nude mice for 4 ation p;E staining and immunohistochemistry(IHC). Results Scarce collagen fibers planted oderate collagen fibers in noninduced BMSCsscaffold group, and large quantities of need collagen fibers in osteoinduced BMSCsscaffold group. Enhanced formation of type Ⅰ collagen ation in noninduced BMSCsscaffold group (0.1489±0.0037) and scaffold alone group(0.0775±0.0058)（Plt;0.05）. Conclusion Osteoinductive culture can enhance type Ⅰ collagen formation in nude mice by cryopreserved BMSCs. 　　KEY SCs)是一种能分化为成纤维细胞、成骨细胞和脂肪细胞等多种类型细胞的多能干细胞，在骨组织、软骨组织以及牙周组织缺损的再生医学中有着广泛的应用前景［1］。本课题组前期研究发现，冻存BMSCs复苏传代后，在体外培养条件下仍保持了较高的细胞存活率、细胞增殖及成骨分化能力，并且具有未冻存细胞相似的体内促进牙周组织再生的能力［23］。寻找适宜的细胞培养条件对于牙周再生医学有着重要意义。因此，本实验拟研究矿化诱导培养能否促进冻存后的BMSCs在裸鼠体内形成Ⅰ型胶原，从而为选择适宜培养条件、提高BMSCs体内再生牙周组织的能力提供参考。 　 　1 材料和方法 　　 　　1.1 实验动物及主要试剂 　　健康成年Beagle雌性犬（体质量11 kg)、BALB/c裸鼠42只(4～6周，体质量18～23 g)；新生牛血清(江滨生物，杭州)；DMEM(Gibco，美国)；地塞米松、维生素C和β甘油磷酸钠(Sigma，美国)；BME10X医用胶原膜 (北京 中国 医学 科学 院生物医学工程研究所)；Ⅰ型胶原抗体、SABC过氧化物酶试剂盒(博士德生物，武汉)；DAB显色试剂盒、EDTA抗原修复液(福州迈新生物技术开发有限公司)。 　　1.2 方法 　 　　1.2.1 BMSCs的分离与冻存 　　采用实验室所用的“改良全骨髓培养法”获取细胞［4］，培养传至第2代；将2.5×1