12e5本操作程序》课件(新人教版选修3).pptVIP

金太阳新课标资源网 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 操作过程 目的基因的检测与鉴定 一、为什么要有“目的基因的获取”这一步？ 二、为什么要有“表达载体的构建”这一步？ 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性 单独的DNA片段──目的基因是不能稳定遗传的。构建表达载体的目的是为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能表达和发挥作用。 三、为什么要有“目的基因导入受体细胞”这一步？ 四、为什么要有“目的基因的检测与鉴定”这一步？ 含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化 因为目的基因是否真正插入受体细胞的DNA中，是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达，只有通过检测、鉴定才能得知。 编码区上游 编码区下游 RNA聚合 酶结合位点 RNA聚合 酶结合位点 编码 蛋白质 调控 调控 原核细胞 真核细胞 真核细胞 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 1.基因文库 基因组文库与部分基因文库的关系 2.基因文库的构建方法 ①鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (直接分离法) (一)从基因文库中获取目的基因 ②反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 核酸酶H DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) ③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 2.基因文库的构建方法 (二)利用PCR技术扩增目的基因 1. 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________ 的核酸合成技术 2.原理：__________ 选修1 P10 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 (二)利用PCR技术扩增目的基因 3.过程 DNA双链复制的基本原理 原理： 前提： 条件： PCR扩增仪 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 PCR（聚合酶链式反应）技术扩增 由穆里斯等人于1988年发明，并于1993年获得若贝尔化学奖。 PCR反应的过程：（变性、退火、延伸、多次重复） 变性 退火 延伸 结果：双链DNA分子数为2n 可获取大量目的基因 3.过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 引物延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 1. 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____ 复制___________ 的核酸合成技术 2.原理：__________ 4.方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） 5.结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 3.过程: (变性、退火、延伸) 点点生物学教学 寻根问底—— （1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？ 提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。