52多聚酶链式反应扩增dna片段课件(人教版选修一).pptVIP

* ②_______________________ DNA 母链 ①_______________ 解旋酶 在 DNA 复制中的作用 参与的组分 课题 2 多聚酶链式反应扩增 DNA 片段 生物体内的 DNA 复制 细胞核 1．DNA 复制的场所是______________。 2．参与 DNA 复制的组成成分与反应条件 打开 DNA 双链 提供 DNA 复制的模板 ⑤___________________________________ ___________________________________ 引物 ④_____________________________ DNA 聚合酶 合成子链的原料 ③_______________ 在 DNA 复制中的作用 参与的组分 续表 4 种脱氧核苷酸 催化合成 DNA 子链 使 DNA 聚合酶能够从引物的 3′端 开始连接脱氧核苷酸 PCR 扩增技术 1．概念 DNA PCR 技 术 是 ____________________ 的 简 称 ， 是 一 种 在 ________ 进行的迅速扩增 DNA 的技术。它能够以极少量的 __________为模板在短时间内复制出上百万份。 2．PCR 反应过程 (1)变性。 (2)复性。 (3)延伸。 3．结果 两个引物 DNA 聚合酶只能特异性地复制在______________之间的 DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 多聚酶链式反应 体外 DNA 含量测定 1．原理：利用 DNA 在______________的紫外线波段的吸 收峰曲线来测定相应含量。 260 nm 2 ．计算公式 ：DNA 含 量 (μg/mL) ＝ 50×(260 nm 读 数)×(________________)。 稀释倍数 两者都需要模板、四种脱氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一 定缓冲溶液环境 相同点 30 多次 受生物自身控制 循环次数 耐高温的 TaqDNA 聚合酶 不需要耐高温聚合酶 DNA 聚合酶 在体外迅速扩增 边解旋边复制，半保留复制 特点 分别从两条链的引物端开始，连 续合成，控制温度条件在 72 ℃ 在引物的基础上，一条链连续 合成，另一条不连续合成 合成子链 RNA 或者单链 DNA 一小段 RNA 引物 加热至 90 ℃左右，双链全部解 开，不需要解旋酶 在解旋酶的作用下，细胞提供 能量，部分解旋 解旋方式 PCR 扩增 体内复制 DNA 的体内复制与 PCR 扩增的区别与联系 PCR 技术的原理及过程 1．PCR 原理 PCR 技术利用了 DNA 的热变性原理：在 80～100℃的范围 内，DNA 的双螺旋结构解体，双链分开，当温度缓慢降低时， 两条彼此分离的 DNA 链又会重新结合成双链。 2．PCR 的反应过程 (1)变性：当温度上升到 90 ℃以上时，双链 DNA 解旋为单 链。 (2)复性：温度下降为 50 ℃左右时，两种引物通过碱基互 补配对与两条单链 DNA 结合。 (3)延伸：当温度上升至 72 ℃左右时，四种脱氧核苷酸在 DNA 聚合酶的作用下，合成新的 DNA 链。 3．PCR 反应的条件 (1)稳定的缓冲液环境。 (2)DNA 模板。 (3)分别与模板 DNA 两条模板链相结合的引物。 (4)A、T、C、G 四种脱氧核苷酸。 (5)耐热的 DNA 聚合酶，一般用 TaqDNA 聚合酶。 (6)能严格控制温度变化的温控设施。 PCR 扩增技术与 DNA 体内复制的区别 【例 1 】下列属于 PCR 扩增区别于 DNA 体内复制的是 ( ) ①需要解旋酶 ②需要引物 ③常温常压下进行 ④以四 种脱氧核苷酸为原料 ⑤需要耐高温的 TaqDNA 聚合酶 ⑥边 解旋边复制 ⑦可以短时间得到大量拷贝 ⑧需要模板 A．①②③④⑤⑥⑦⑧ C．⑤⑦ B．②③④⑤⑥⑦ D．③④⑥⑧ 【名师点拨】：体内复制与 PCR 扩增既有区别又有联系， PCR 体外扩增概念很明确，在体外，加热解旋，因此需要耐高 温的 TaqDNA 聚合酶，它能以极少量的 DNA 为模板，在几小 时内复制出上百万份的 DNA。 【答案】：C