基于DPO引物的空肠弯曲菌PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

第 36 卷第4 期 中国预防兽医学 t民 Vo l. 36 ,No.4 2014 年 4 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Apr. 2014 doi: 10.3969/j .issn.1008-0589.2014.04.10 基于 DPO ~I 物的空肠弯曲菌 PCR 检测方法的 建立与初步应用 徐义刚 1 ，李丹丹 2 ，刘忠梅 1 ，吴 岩 1 ，魏冬旭 1 ，李苏龙户 (1.黑龙江出入撞检验检疫局检验检疫技术中心，黑龙江哈尔滨 150001; 2. 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，海南海口 570125) 摘 要:为建立特异、快速检测空肠弯曲茵的方法，本研究针对其 gyrA 基因设计了一对双启动寡核普酸引 物(DPO) ，建立了空肠弯曲菌 DPO-PCR 检剧方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1.2xl02c缸/mL，在 48 .C ~68 .C 退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范国宽，同时 DPO 引物特异性强， PCR 反应过程中不会产生非特异性扩增。利用该方法对采集的 184 份样品进行检测，共计检出 17 份空肠弯曲菌阳性 样品，经国标法(GB/T 4789.9-2008) 复验，两者检测结果一致，显示了良好的实用性。该 DPO-PCR 方法设计简 单、特异性强，为致病微生物的快速准确检测提供了新方法。 关键词:空肠弯曲菌; gyrA 基因; DPO-PCR 中固分类号: S852.61 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2014)04-0293-04 Development and preliminary application of DPQ-based PCR method for detection of Campylobacterjejuni 2 1 1 XU Yi-gang l, LI Dan-dan , LIU Zhong-mei l, WU Yan l, WEI Dong-xu , LI Su-long • (1. Technical Centre of Heilongjiang En缸子exit Inspection and Quarantine Bureau , Harbin 150001 , China; 2. Technical Centre of Hainan Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau , Haikou 570125 , China) Abstract: In this experiment , a Dual-priming oligonucleotide (DPO)-based PCR method for detection of Campylobacterjejuni was developed using gyrA gene of C.jejuni as target gene. The DPO-PCR method had a detection limit of 1.2x 102 cfu for C.jejuni , which was able to efficiently amplify target gene in the annealing temperature range