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Code No. 6210A 研究用 PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 说明书 v201702Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 保 存 1 ● 1st-strand cDNA 合成反应 2 ● RT-PCR 反应 2 ● RNA 样品的制备 3 ● 相关产品 3 ● 制品说明 本制品是使用 PrimeScript II RTase 从 Total RNA 或 Poly (A)＋ mRNA 合成 1st Strand cDNA 的试剂 盒。含有 1st Strand cDNA 合成所需的全部试剂。 以结构复杂的 RNA 或长链 RNA 为模板进行 cDNA 合成时，cDNA 合成受到抑制的主要原因是 RNA 高级 结构与反转录酶的非特异性结合。并且，由于反转录酶的错配引起的非特异性延伸，对 RT-PCR 或全长 cDNA 的合成非常不利。PrimeScript II RTase 是对 PrimeScript RTase 进行进一步改良的反转录酶， 本反转录酶可以很好地抑制 RNA 高级结构与反转录酶的非特异性结合。 本制品使用了 PrimeScript II RTase，利用Oligo dT 从 PolyA 开始进行延伸反应，使用标准反转录温度 42℃，不仅能维持 PrimeScript RTase 原有的卓越的 cDNA 合成效率和 cDNA 合成速度，同时可以合成 本底低、纯度高、完整性好的 cDNA。另外，反转录反应液配制时所产生的非特异性延伸是抑制 cDNA 合 成的主要原因，本制品能有效控制这一现象。反应液配制后，冰上放置直至反转录反应开始，不会发生抑 制 cDNA 合成的现象。 合成的 1st Strand cDNA 可广泛应用于 2nd Strand cDNA 合成、杂交、PCR 法扩增等。特别适用于全 长 cDNA 文库制作、高纯度全长 cDNA 合成等。 ● 制品内容 (50 次量) PrimeScript II RTase (200 U/μl) 50 μl 5×PrimeScript II Buffer 200 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl dNTP Mixture (10 mM each) 50 μl Oligo dT Primer (50 μM) 50 μl Random 6 mers (50 μM)