东亚钳蝎Na通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达.PDFVIP

学 报 ２２０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１７，４８（２）：２２０－２２６ ＋ 东亚钳蝎Ｎａ通道毒素ＢｍｋＮａＴｘ１２的基因克隆与重组表达 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ 夏　扬 ，胡玲玲 ，陈　姣 ，卢悟广 ，颜怀江 ，霍介格 ，曹　鹏 １ ２ （南京中医药大学附属省中西医结合医院，南京２１００２３；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室，南京２１００２８） ＋ 摘　要　利用野生东亚钳蝎毒腺构建ｃＤＮＡ文库，并通过序列比对确定了一条全新的Ｎａ通道长链毒素ＢｍｋＮａＴｘ１２并克 隆出其全长ｃＤＮＡ序列。序列比对显示ＢｍｋＮａＴｘ１２的序列与墨西哥毒蝎的 毒素Ｃｎ１２具有较高的结构相似性，通过同源 β 模型构建并选取打分最高的模型得到ＢｍｋＮａＴｘ１２的预测结构，经分子动力学优化发现蛋白结构在３００ｎｓ趋于稳定，而蛋 白２０、３５、５２个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在ｌｏｏｐ区域导致。进一步构建了ＢｍｋＮａＴｘ１２Ｆｃ融合蛋白 重组表达系统，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术确定重组蛋白最佳表达时间，并在ＨＥＫ２９３细胞中成功表达出ＢｍｋＮａＴｘ１２Ｆｃ融合蛋 白。经蛋白Ａ亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达９５％。此外，全细 胞膜片钳实验结果显示：ＢｍｋＮａＴｘ１２Ｆｃ在１ ｍｏｌ／Ｌ浓度下能增大２０％ Ｎａｖ１７峰电流。研究结果为后续的生物学功能研 μ 究奠定了理论基础。 ＋ 关键词　东亚钳蝎；蝎毒素；基因克隆；表达；Ｎａ通道 中图分类号　Ｒ９３１７４；Ｒ３４；Ｒ９６６　　文献标志码　Ｂ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１７）０２－０２２０－０７ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ ＋ 引用本文　夏扬，胡玲玲，陈姣，等东亚钳蝎Ｎａ通道毒素ＢｍｋＮａＴｘ１２的基因克隆与重组表达［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１７，４８（２）：２２０ －２２６ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＸＩＡＹａｎｇ，ＨＵＬｉｎｇｌｉｎｇ，ＣＨＥＮＪｉａｏ，ｅｔａｌＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＢｍｋＮａＴｘ１２，ａｎｅｗｖｏｌｔａｇｅｇａｔｅｄｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｆｒｏｍｓｃｏｒｐｉｏｎＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉｉＫａｒｓｃｈ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１７，４８（２）：２２０－２２６ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＢｍｋＮａＴｘ１２牞ａｎｅｗｖｏｌｔａｇｅｇａｔｅｄｓｏ ｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｆｒｏｍｓｃｏｒｐｉｏｎＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉｉＫａｒｓｃｈ １牞２ １牞２ １牞２ １牞２ １牞２ １牞２ １牞２ ＸＩＡＹａｎｇ 牞ＨＵＬｉｎｇｌｉｎｇ 牞ＣＨＥＮＪｉａｏ 牞ＬＵＷｕｇｕａｎｇ 牞ＹＡＮＨｕａｉｊｉａｎｇ 牞ＨＵＯＪｉｅｇｅ 牞ＣＡＯＰｅｎｇ １ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ牞ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞Ｎａｎｊｉ