人教版教学课件选修1多聚酶链式反应扩增DNA片段(版面精致,内容详实,实用性强).pptVIP

* 1 □ PCR概述 □ PCR原理 □ PCR实验操作 □ PCR应用 2 PCR技术概论 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80 年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA 片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA 供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR 几小时便可完成。PCR 技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。 3 温故而知新（DNA的结构与复制） 一、DNA结构： 1、DNA的基本单位： 脱氧核苷酸 碱基 脱氧 核糖 P 4 2、化学结构： P P P P P P P P 3’端 3’端 5’端 5’端 5 DNA结构 6 二、DNA复制： 1、复制方式： 7 2、DNA复制所需条件： 模板：__________________ 原料：__________________ 酶：__________________ 能量：_______ 引物：__________________ 适宜的温度与酸碱度 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 DNA或RNA片段 ATP 8 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3’端延伸DNA链。 引物与模板结合 引物与模板结合 9 理论基础 1、PCR原理 体外模拟DNA复制的过程，对DNA进行扩增的技术。 其所需条件（即标准的pcr反应体系）： 10×扩增缓冲液 　 10ul4种dNTP混合物 　 各200umol/l2种引物 　　　　 各10～100pmol　模板DNA　　　 　 0.1～2ug　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　mg2+　　　　　　 1.5mmol/l加蒸馏水至 　 100ul 10 参加pcr反应的物质主要有五种，即引物、酶、dNTP、模板和mg2+ 1、PCR原理 其中引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板DNA在体外大量扩增。引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 11 2、PCR一般过程（变性→退火→延伸） 12 实验设计 （1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备） （2）用微量移液器按配方往微量离心管中依次加入各组分（移液） （3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合） （4）将微量离心管放在离心机上（离心） （5）将微量离心管放入PCR仪中，设置好PCR仪的循环程序（反应） 13 PCR仪 14 PCR反应（无PCR仪时） 15 △PCR技术应用十分广泛，可用于分子生物学、遗传工程、肿瘤学、法医学、预防医学及病毒和病原体的诊断等各个领域。 △临床应用举例： 1.?遗传病诊断：α型、β型地中海贫血症，血友病以及苯丙酮尿症的产前胎儿诊断等。 2.?病毒感染疾病诊断：肝炎病毒系列(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等)，艾滋病毒(HIV-I)、人乳头瘤病毒(HPV)、人巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)等。 3.?传染性病原体检测：沙眼衣原体、肺炎支原体、立克次氏体、真菌、梅毒螺旋体、疟原虫、弓形体、结核杆菌、分枝杆菌等。 4.?肿瘤基因检测：癌基因、抑癌基因、肿瘤药敏基因等。 PCR技术的应用 *