ProteinA亲和层析介质.PDF

  Protein A 亲和层析介质     1、产品描述    金斯瑞 Protein A 亲和层析介质适用于从生物体液或细胞培养液中一步纯化免疫球 蛋白及其亚基或者片段。重组Protein A 配体偶联于4% 的琼脂糖，在纯化免疫球蛋白上 表现出较高的吸附能力。Protein A 亲和层析介质的静态吸附能力＞20 mg 人IgG/ml 介质， 动态吸附能力会随着目的抗体、流速等因素影响而产生变化。Protein A 亲和层析介质的 主要特点详见表1。    从金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白分离Protein A ，主要通过Fc 区结合哺乳动物的IgG。 天然Protein A 含有五个IgG 结合域和许多未知的功能重复序列。重组Protein A 只包含五 个高亲和力的IgG 结合结构域，并去除了其它非主要结合域以降低非特异性结合。Protein  A 和IgG 的相互作用仅涉及Fc 区域，而不影响Fab 片段和抗原的结合。    表1：  柱体积  5 ml （10 ml 50%的悬浊液）  配体  大肠杆菌表达的重组金黄色葡萄球菌Protein A  配体IgG 识别位点  5  配体相对分子量  约34 kDa  配体等电点  5.17  偶联密度  约2 mg 重组Protein A/ml 介质  静态吸附能力  ＞20 mg 人IgG/ml 介质  基质  琼脂糖，交联度4%  平均粒径  90 μm (45‐165 μm)  储存溶液  20%乙醇  储存&稳定性  2 ‐8℃储存18 个月    2、纯化步骤    缓冲液制备：  用于配制的水和试剂需要高纯度，缓冲液使用前建议用0.45 μm 滤膜过滤一遍。  平衡缓冲液：20 mM Na HPO , 0.15 M NaCl, pH 7.0  2 4 洗脱缓冲液： 0.1 M glycine, pH 3.0  中和缓冲液：  1 M Tris, pH 8.5    样品制备：   为确保离子强度和 pH 值有利于抗体结合，有必要对血清样品进行稀释处理。腹水 或者细胞培养液上清至少用平衡缓冲液进行1:1 稀释，或者将样品用平衡缓冲液透析过 夜。    装柱操作：      1）充分摇匀以重悬树脂，吸取1 ml 浆液至新的层析柱中，层析柱中预先加入1 ml 平衡 缓冲液。  2 ）让树脂自然沉降，流出平衡缓冲液。  3 ）加入5 ml 平衡缓冲液至层析柱中平衡树脂，按约1 ml/min