脂肪酶的失活动力学与疏水特性研究.pdfVIP

第39卷第5期 应 用 化 工 V01．39No．5 2010年5月 App~edChemicalIndustry May2010 脂肪酶的失活动力学与疏水特性研究 邢建宇，杨建军 (长安大学 环境科学与工程学院，陕西 西安 710054) 摘 要：在不同温度下考察脂肪酶的失活动力学，并将失活率不同的脂肪酶使用疏水层析色谱进行分析 ，查看其保 留行为。结果表明，设定4O 时的酶活为 100％，则酶活为0—100％在疏水层析柱上表现为2．16～2．39min的保 留时间区间。但是在该保留时间区间内，脂肪酶的热失活引起的结构变化，在疏水柱上的保留时间并不呈线性变 化，使用z值查看脂肪酶与固定相的结合情况，表明z值的变化与脂肪酶失活情况下的结构变化不存在明显的对 应关系。 关键词：脂肪酶；失活动力学；疏水层析 中图分类号：Q556 文献标识码 ：A 文章编号：1671—3206(2010)05—0710一O3 Investigation onthedeactivationkinetics andhydrophobicpropertiesoflipase XINGJian．yu，YANGJianqun (SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering，Chang’naUniversity，Xi’an710054，China) Abstract：Deactivationkineticsoflipasewasinvestigatedunderdifferenttemperature．Lipaseswithdiffer- entinactivationratewereanalyzedbyhydrophobicinteractionchromatographyandretentionbehaviorwas studied．Results show htatlipase activity of0 — 100％ would caused a retention time intervalof 2．16-2．39minwhendefinedlipaseactiviytat40oC as100％．Inhtistimeinterval，structuralchange causedbyheatinactivationandretentiontimeofitwasnotchangesinlinearway．Wheninteractionofli- paseandstationaryphasewasinvestigatedbyZ value，therewasnocorrespondingrelationshipbetween changesofZ andinactivationoflipaseobserved． Keywords：lipase；deactivationkinetics；hydrophobicinteractionchromatography 多数的酶都是蛋白质，蛋白质对于温度非常敏 Nali2PO4、(NH4)2SO4均为分析纯。 感，温度过高，会引起蛋白质的结构发生变化，作为 ToyoperalSuperButyl-550型疏水层析柱；LC- 酶来说，其活性部位结构的改变会引起酶的失活，在 2010A型高效液相色谱仪。 这一过程中，往往会伴随着疏水基团的暴露，其溶解 1．2 脂肪酶的失活实验 性也会降低。疏水层析(HIC)是根据分子表面疏水 称取酶粉5g，先以少量磷酸缓冲液溶解，并用 性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较 玻璃棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中，沉渣部分 为常用的方法，分子表面疏水基团越多，则在疏水层 再加入少量缓冲液