分枝杆菌降解甾醇侧链中底物及其增溶剂的研究.pdfVIP

第 3 1 卷第5 期 化学反应工程与工艺 Vol 31, No 5 2015 年 10 月 Chemical Reaction Engineering and Technology Oct. 2015 文章编号：1001—7631 ( 2015 ) 05— 0423—07 分枝杆菌降解甾醇侧链中底物及其增溶剂的研究 徐阳光，范雅敏，罗 兰 ，王海清，关怡新，姚善泾 浙江大学化学工程与生物工程学院，浙 江 杭 州 31002 摘要：为克服甾醇生物转化中存在的底物溶解度偏低的问题，拟选取多种有机溶剂、环糊精及其衍生物作为 增溶剂，以探讨不同底物甾醇对其偏好性，并对增溶剂添加时间、添加量、底物的投料浓度等进行了详细研 究。结果表明，植物甾醇( 混合甾醇) 最适于作为侧链降解转化底物，且底物甾醇对不同的增溶剂无明显偏好 性。有机溶剂作为增溶剂时，乙醇和丙酮在提高产率方面均优于其它有机溶剂；而环糊精作为增溶剂时，甲 基-，环糊精效果最好，在投料浓度为15 g /L 时(环糊精与底物物质的量比2:1) ，产率仍不低于60% 。 关键词：植物甾醇側链降解分枝杆菌有机溶剂环糊精及其衍生物 中图分类号：TQ467.95 文献标识码： A 为解决甾体激素类药物合成中薯蓣皂素和剑麻皂素等半合成原料短缺的问题，采用微生物转化法 降解植物甾醇侧链，以生产甾体类药物中重要的中间体雄甾-4-烯-3,17-二酮(A D )是目前的研究热点[1]。 植物甾醇侧链降解过程可分为扩散和酶催化反应两个阶段，扩散过程包括底物固体颗粒的溶解、溶解 后的底物分子向细胞内扩散以及产物分子向细胞外的转运等。与甾醇侧链降解有关的酶属于胞内酶， 只有底物进入细胞后，转化反应才得以进行，但甾体类物质在水溶液中的溶解度很低（溶解度仅为 10-5〜 10-4 m o l/L )，不能很好地与转化酶接触，会造成转化率低、发酵时间长等一系列问题[2]。底物的 溶解及传递是侧链降解过程中关键的控制步骤，直接决定着产物产率的高低。因此，改善底物的溶解 性，増加反应体系中的有效底物浓度，强化底物和产物分子的内外传递，建立合理有效的生物转化体 系是提高甾醇侧链降解反应效率的关键因素之一。 选取合适的有机溶剂和环糊精及其衍生物是増加底物溶解性的常用方法。但特定的底物是否对増 溶剂具有偏好性，目前尚未见文献报道。而且，分枝杆菌降解甾醇侧链过程中关于底物也少有系统地 研究。本研究拟选取5 种甾醇（豆甾醇、灸谷甾醇、植物甾醇、胆固醇、麦角固醇）作为底物，6 种 有机溶剂[乙醇、甲醇、二甲基亚砜(DM SO )、# ，-二甲基甲酰胺(D M F)、丙酮、1,2-丙二醇]和8 种环 糊 精 （灸环糊精、甲基-界环糊精、羧甲基，-环糊精、羟丙基，-环糊精、2-羟丙基，-环糊精、磺丁基，- 环糊精、y-环糊精、羟丙基-y-环糊精）作为増溶剂，对底物的偏好性和分枝杆菌降解甾醇侧链的催化 过程进行研究，以改善底物的溶解性，进一步提高底物投料浓度。 1 实验部分 1.1 实验材料 分枝杆菌（M yco to c 纪r ?■画sp . M B 3863)，购自中国科学院微生物研究所；豆甾醇（stigm asterol ， 收稿日期：2014-05-04;修订日期：2014-06-20 。 作者简介：徐阳光（1989—) ，男，硕士研宄生；关怡新（1966—) ，女，教授，通讯联系人。E-mail:guanyx@zju.edu.cn 。 基金项目：浙江省科技计划项目（2005C31028)。 424 化学反应工程与工艺 2015 年 10 月 纯度95°%)，, 谷甾醇（^ sitosterol ，纯度80°%)和混合植物甾醇（phytosterols ，其中豆甾醇26.2%〇、 片谷甾醇45%、菜油甾醇23.5%、菜籽甾醇3.2%)，购自西安海斯夫生物科技公司；胆固醇(cholesterol， 纯度95%)，麦角固醇（ergosterol，纯度95%)，灸环糊精明-CD )，2-羟丙基，-环糊精(2-HP-A-CD )，