3生化反应型生物芯片.doc

§3 生化反应型生物芯片 生化反应型生物芯片是利用微细加工工艺，集成样品预处理、微、、微检测器等微型生化学功能器件、电子器件和微流器件。(Polymerase chain reaction)芯片和微反应器(microreactor)。下面将以这两种类型的芯片为代表来介绍生化反应型芯片。 3.1 PCR芯片 3.1.1 常规PCR技术 在进行生物研究和实际检测时，有时待测样品的量很少或者从样品中提取的分子浓度很低，为了得到一个理想的结果，需要对样品分子进行放大。通过核酸扩增反应对DNA、RNA进行扩增。PCR技术能快速特异地扩增目的DNA，扩增的过程中PCR产物的量是以几何级数的方式递增的，其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”那样g2＋、合适的缓冲液体系以及DNA变性、复性和延伸的温度与时间等，可以使极少量的核酸经过一系列反应，在较短的时间内扩增上百万倍。 3.1.2 芯片PCR的特点和优势 虽然常规的PCR技术已广泛应用于生命科学研究及相关领域，并且在应用过程中不断得到改进，但目前仍然存在着耗时太长，操作繁琐，试剂消耗量大，扩增结果不稳定等缺点。因此人们一直在寻求更快速更简便的PCR方法。PCR芯片的出现便是人们向这一方向努力所得的结果。用PCR芯片进行PCR扩增及相关检测，可简化操作，提高效率，克服常规PCR技术的一些缺点。与常规PCR技术相比，在芯片上实现反应有以下优点： ⑴ 由于小，反应表面积与体积的比值大，而使得反应速度快。虽然由于反应器表面积的增大导致对样品非特异吸附可能性增加，可以通过对反应器表面进行化学处理以降低其表面的非特异性吸附相对常规PCR反应所用的Eppendorf管，PCR芯片的表面积与体积比增大10倍以上，再加上反应体积很小，因此反应速度要比常规PCR反应快多。 ⑵ 由于小反应过程易于控制。 ⑶ 由于小反应成本大大降低⑷ PCR芯片具有体积小能耗低⑸ PCR芯片易于与样品分析的其它部分集成在一起，从而可以实现样品分析的自动化。 3.1.3 PCR芯片研究进展 自从1993年Northrup等在微加工制作的微反应池内成功地实现了DNA扩增以后1，人们对在芯片上实现PCR的兴趣越来越大，而且自那以后世界上许多大学的研究小组和一些公司开始投入到PCR芯片的研制工作中。虽然各单位研制的PCR芯片系统设计、开发和构建系统，几个问题： 芯片的加工材料 芯片的加热－冷却组件温度控制方式 芯片表面的处理 反应液体的加样和封闭 反应结果的检测 （1）PCR芯片的加工材料 使用玻璃作为加工材料宾夕法尼亚大学研究小组伦敦帝国理工大学的Manz小组使用的是玻璃。一因为玻璃是透明的，便于光学检测玻璃的绝缘性能好与硅相比，要差很多，一般普通玻璃的导热率是1 W m-1 K-1，Pyrex玻璃（硼硅酸玻璃，一种耐热玻璃）的导热率更差一些，只有0.78 W m-1 K-1制造PCR芯片硅材料具有很高的导热率（138 W m-1 K-1），硅是微加工中使用最多的一种材料，PCR和毛细管电泳芯片，导热率是最差的，一般在0.1~0.3 W m-1 K-1 之间，因此较少被人们选用。但是，如果选择合适的加热方式，例如红外线非接触式加热，也可以达到良好的扩增效果。例如弗吉尼亚大学Landers小组研制的PCR芯片用聚酰亚胺制成的，通过红外线加热，在4分钟内得到扩增结果的加热－冷却组件由于PCR反应是一个不断在三个温度区域之间循环的反应过程，因此选用适当的加热－制冷组件对于整个系统的效率有很重要的意义。 μl）。他们在每个反应腔的周围蚀刻很深的小槽以进行热隔离，加热通过整合在基底片上薄膜电阻加热器℃温度范围内升温和冷却速率为1～2℃/s，而模拟结果显示当加热功率为1W时微型PCR装置的升温及冷却速率可达15℃/s。实验中他们以2.5W的功率加热，微反应池中的升温速率为80℃/s，降温时以风扇冷却速率为40℃/s。Poser等人的报道更坚定了人们将PCR装置微型化的努力。 Manz研究小组用铜块加热器与散热片相结合铂热传感器来控制温度；加州伯克利分校的Mathies小组利用电阻式加热器与风扇配合进行温控；劳伦斯－利物莫国家实验室Northrup小组是把薄膜电阻加热器与芯片集成在一起，与空气制冷相配合进行温度控制；帕尔帖制冷器选为温度控制元件半导体加热制冷器结构简单、使用方便帕尔帖制冷器两个陶瓷片中间夹着的许多p-型半导体和n-型半导体微结构构成给它施加直流电压，便可在陶瓷片的某一面上获得加热效果，在另一片陶瓷片上则出现制冷。以上所述均可归为接触式温度控制元器件。这些温度控制元器件的缺点是对芯片材料的导热率有一定要求，即一般选用的材料是硅，次之为玻璃，而对于导热率很低的塑料，是不的，因此接触式温度控制方式要尽量避免热阻值大的材料。现在有人使用非