赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究.docVIP

　　赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究 作者：满淑丽 高文远 颜璐璐 张萱 【摘要】 目的对赤芝子实体进行化学成分研究，并对单体化合物进行细胞毒活性测定。方法利用硅胶柱层析，Sephadex LH-20柱色谱以及HPLC等手段分离纯化得到单体化合物，并进行结构鉴定，通过MTT法对其进行细胞毒活性测定。结果从赤芝子实体中分离并鉴定了3个单体化合物的结构，分别是灵芝醇B（Ⅰ），麦角甾醇（Ⅱ）和过氧化麦角甾醇（Ⅲ），这3个化合物对小鼠肺腺癌LA795细胞的IC50分别为77.9，22.5，84.9μg/ml。结论3种化合物皆有细胞毒活性，其中以麦角甾醇（Ⅱ）为最好。 【关键词】 灵芝 分离 鉴定 细胞毒活性 赤芝Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.)Karst系担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，具有补中益气、滋外强壮、扶正固本、延年益寿等功效，被列为名贵药材。20世纪70年代以来，我国学者在中西医结合的学术思想指导下，运用 现代 医药生物技术先后对多种灵芝属真菌的子实体、菌丝体、孢子粉及发酵液的提取物或有效成分进行了系统的化学、药 理学 研究，对灵芝扶正固本作用的机理进行了有益的探索［1］。近年来，灵芝有效成分的分析及药理作用，临床应用等的研究已经引起国际上的关注。为了进一步研究其活性成分，本实验对赤芝子实体进行提取分离，得到3个化合物，经鉴定其结构分别为灵芝醇B（ganoderiol B，Ⅰ），麦角甾醇（ergosterol，Ⅱ）和过氧化麦角甾醇（ergosterol peroxide，Ⅲ），其体外抗肿瘤活性作用研究表明对小鼠肺腺癌LA795细胞具有细胞毒活性。 1 仪器与材料 Gulliver Series高效液相色谱仪(日本JASCO公司)；核磁共振谱仪(VARIAN INOVA 500MHz)；TECAN A-5002 Spectra型酶标仪(奥地利)。实验用硅胶(青岛海洋化工)；Sephadex LH-20(Amersham Pharmacia Biotech)；RPMI1640培养基(Gibco公司)；胎牛血清(天津市庆星科技有限公司)；噻唑蓝(MTT，Sigma公司)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司)。 赤芝Ganoderma lucidum(Fr.)Kart，由天津中新药业提供，经天津大学药物 科学 与技术学院高文远教授鉴定，植物标本现存于天津大学药物科学与技术学院天然药物学实验室。小鼠肺腺癌LA795细胞株，由 中国 协和医科大学基础医学研究所提供。 2 提取分离 将赤芝药材（5 kg）粉碎，用95%的乙醇（药材的10倍量）加热回流提取5h，过滤，滤渣再用10倍量95%乙醇加热回流提取，如此提取5次，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得提取物250g。将浸膏混悬水溶液分别用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇萃取。其中石油醚层部分30g（100～200目硅胶400 g装柱），干法上样，采用石油醚－醋酸乙酯溶剂系统6个梯度（50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶1）洗脱，共收集得到12个组份，从其第10个组分中经过硅胶层析分离得到化合物Ⅰ（218.2 mg）。醋酸乙酯层部分40g以（100～200目硅胶1000 g装柱）CHCl3-MeOH（100，99∶1，98∶2，95∶5，9∶1，85∶15，80∶20∶2，70∶30∶3， 6∶4，5∶5）梯度洗脱，共得到16个组分，对其第2个组分进行重结晶得到化合物Ⅱ，剩余部分经过凝胶柱层析和正相HPLC分离，得到化合物Ⅲ（10 mg）。 3 结构鉴定 化合物Ⅰ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH：5.47(1H，d，J=6Hz，7-H)， 5.32(1H，d，J=6.5Hz，11-H)，5.40(1H，t，J=7Hz，24-H)，3.24(1H，dd，J=11.5，4.5)，4.00(2H，s，26-H)，1.67(3H，s，27-H)，1.01(3H，s，29-H)，0.985s(3H，s，30-H)， 0.92(3H，d，J=6.5Hz，21-H)， 0.88(3H，s，28-H)，0.88(3H，s，19-H)， 0.57(3H，s，18-H)。13MR数据见表1，以上数据与 化合物Ⅱ ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH:5.568(1H，d，6-H)， 5.384(1H，d，7-H)，5.204(1H，m，22-H)，5.204(1H，m，23-H)，3.637 (1H，m，3-H)，1.038(3H，d，21-H)，0.946(3H，s，19-H)，0.918(3H，d，25-H)，0.846(3H，d，27H)，0.831(3H，d，28H)，0.63