细菌的生化试验.ppt.ppt

细菌的生化试验 不同种类的细菌，由于其细胞内新陈代谢的酶系不同，对营养物质的吸收利用、分解排泄及合成产物的产生等都有很大的差别 细菌的生化试验就是检测某种细菌能否利用某种物质及其对某种物质的代谢及合成产物，确定细菌合成和分解代谢产物的特异性，借此来鉴定细菌的种类 糖发酵试验 原理： 多糖－→酸性产物－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色（若产气者有气泡出现） 培养基：微量发酵管 试剂：溴甲酚紫（pH7.0紫色- pH5.4黄色） 结果：培养基是否有酸性变色（变黄） 应用：观察细菌对糖度的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定 糖发酵试验 靛基质试验（吲哚试验） 原理：细菌若含有色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质 培养基：蛋白胨水溶液 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果： 培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： － 应用：用于肠道杆菌的鉴定 靛基质试验 甲基红试验（MR） 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂(pH4.2红色- pH6.3黄色） 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 甲基红试验 V-P试验 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 枸橼酸盐利用试验 原理：某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨反应，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应 培养基：枸盐酸盐微量生化管(草绿色) 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴别 枸橼酸盐利用试验结果判定 阴性(-) 阳性(+) 硫化氢试验 原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色的硫化铅或硫化亚铁。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基 变黑 + 为阳性， 不变黑 - 为阴性 应用：常用于肠道杆菌的鉴定 硫化氢试验结果判定 阴性(-) 阳性(+) 尿素酶试验 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴定 尿素酶试验结果判定 阳性(+) 阴性(-) 运动性试验 原理：有的细菌有鞭毛，能运动，可在半固体培养基中观察其运动性 培养基：半固体培养基 结果:只在穿刺线上生长，周围透明，说明无鞭毛；穿刺线四周模糊，有鞭毛。 结果判定与记录 1．靛基质试验（吲哚试验） 取出试管（蛋白胨水）→乙醚1ml，振荡，静置，待分层后→沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛2-3滴，静置，在分界处出现红色玫瑰吲哚为阳性。 ?2．葡萄糖蛋白胨水一分为二 （1）甲基红（MR）试验：取出试管→加入甲基红3-5滴，摇匀，培养基变红色为阳性，不变色为阴性 （2）VP试验：取出试管→VP甲液0.6ml，摇匀→再加VP乙液0.2ml，摇匀，15min后看结果，变红为阳性，不变为阴性，橙色为结果不可信，需重做。 生化反应记录表 * 糖发酵试验结果判断 不分解糖 用“-”表示 培养基不变色 分解糖产酸、不产气 用“+”表示 酸性变色、无气泡 分解糖产酸、产气 用“⊕”表示 酸性变色、有气泡 结果描述 反应现象 兔沙门氏菌 变形杆菌 产气杆菌 大肠杆菌 运动性 吲哚 VP MR 枸椽 尿素 H2S 蔗 甘 麦 乳 葡 *