非霍奇金淋巴瘤中p53基因突变情况研究.docVIP

　　非霍奇金淋巴瘤中p53基因突变情况研究 【摘要】 目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma，NHL)中p53基因第5～8外显子突变情况。 方法 采用PCR-SSCP法对47例NHL进行p53基因第5～8外显子的点突变 研究 。结果 p53基因第5～8外显子总突变率为48.94%(23/47)。其中第6外显子的突变率最高为17.02%，其次为第8外显子，突变率为12.87%；高度恶性组和低度恶性组突变率分别为50.00%（12/24）、34.78%（8/23）（Pgt;0.05）；T细胞和B细胞突变率分别为39.29%（11/28）、47.37%（9/19）(Pgt;0.05)。结论 NHL中存在较高p53基因突变率，提示其突变可能参与了NHL的发生 发展 。高度恶性组p53基因突变倾向于高发。 【关键词】 非霍奇金淋巴瘤；基因，p53；突变 　　Abstract: Objective To investigate the role of p53 gene mutation (exons 5～8)in Non-Hodgkin’s Lymphoma(NHL). Methods A PCR-SSCP method utation in exons 5 to 8 in 47 patients utation rate of 17.02%，exon 8 utation rate in high grade group and loutation rate in T-cell and B-cell derived cases utation rate of p53 gene is present in NHL， utation might play a role in pathogenesis and progression of NHL. 　　Key phoma；genes，p53；mutation 　　非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin′s Lymphoma，NHL）是淋巴造血系统中一种常见的恶性肿瘤，约占所有淋巴瘤的80%～90%［1］。我国NHL约占恶性肿瘤的3%～4%，为恶性肿瘤第8位［2］。p53基因是 目前 发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因［3］，在细胞修复、生长与凋亡的调控中起着重要的作用。NHL的发生和发展过程中涉及染色体易位、体细胞突变、基因扩增和基因缺失等多步遗传学改变。在不同阶段这些改变可引起癌基因的激活和抑癌基因的失活。故在NHL中深入研究p53基因是有必要的。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本 标本取自1998～2003年遵义医学院附属 医院 及贵州省人民医院病理科的各型NHL存档材料47例，所有病例均根据2001年gCl2(0403)购于上海生工生物技术有限公司。PCR反应体系为50μl，其中10×Buffer 5μl、1.5mmol/L MgCl2、200μmol/L dNTPs、0.5μmol/L引物一对、0.2U Taq酶、0.5μg模板DNA。以超纯水补足体积。反应条件：95℃预变性5min，于4min时加Taq酶，94℃变性1min，退火1min，5～8 外显子的退火温度分别是58℃、62℃、60℃、60℃，72℃延伸1min，循环35次，最后一个循环延伸7min，4℃保存备用。以双蒸水代替模板做空白对照。 　　1.3.3 10%非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，硝酸银染色。 　　1.3.4 图像分析 采用全自动凝胶成像分析系统，利用Genesnap软件获取图像，Geools软件(版本3.0)分析凝胶成像。SSCP分析：如出现目的DNA条带泳动变位，即条带增加、减少或移位（待测DNA片段与正常DNA片段电泳距离差gt;3mm则判定链的迁移率有改变），则判断为有突变。 　　1.3.5 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件进行分析。两组间比较采用χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 p53基因突变情况 47例NHL中有23例标本的p53基因组DNA存在异常迁移率带(见图1、2)，表明这些肿瘤可能存在p53基因突变。 　　图1 p53exon7(114bp) PCR扩增产物琼脂糖电泳图（略） 　　M：Marker Track1：空白对照 Track2-9：标本扩增样品 　　图2 p53 exon7 PCR-SSCP图箭头示肿瘤组织突变。注：肿瘤组织较淋巴结反应性增生组织电泳条带减少，定为突变。 C：淋巴结反应性增生，T：肿瘤组织（略） 　　2.2 不同分型NHL中p53突变率 总突变率为48.94%(23/47)，T细胞组和B细胞组突变率以及高度恶性组和低度恶性组突变率差异无显著性（Pgt;0.05），见表2。 　　表2 p5