绵羊体细胞核移植去核前程序的优化.PDF

730 生 物 工 程 学 报 郭延华 等/绵羊体细胞核移植去核前程序的优化 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn May 25, 2017, 33(5): 730−742 DOI: 10.13345/j.cjb.160308 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·动物及兽医生物技术· 1 1 1 1 2 1 郭延华 ，张译元 ，王立民 ，唐红 ，李迎利 ，周平 1 832000 2 832000 , , , . . , 2017, 33(5): 730–742. Guo YH, Zhang YY, Wang LM, et al. Program optimization before enucleation on ovine somatic cell nuclear transfer. Chin J Biotech, 2017, 33(5): 730–742. 摘 要: 目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低，本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间 (3 h 和3–5 h) 、卵母细胞体外成熟时间 (18 h 和24 h) 、供核细胞贴壁率 (10%和30%) 和盲吸法去核时间 (16 hpm 和 18 hpm) 等4 个方面优化。以成熟率、融合率和重构胚胎发育能力作为评价参数。结果表明：在卵巢保存 方面，卵巢保存3 h 组卵母细胞成熟率显著高于3–5 h 组卵母细胞成熟率 (60.18% vs 52.50%) (P0.05) ，重构 胚胎发育力差异不显著 (P0.05) ；在体外成熟时间方面，体外成熟18 h 组和24 h 组卵母细胞成熟率差异极显 著 (53.81% vs 89.06%) (P0.01) ，胚胎发育力差异不显著 (P0.05) ；在融合率方面，贴壁率30%组极显著高于 贴壁率 10%组 (80.85% vs 57.69%) (P0.01) ，在克隆胚胎发育率方面没有显著差异 (P0.05) ，具有贴比率差异 性的细胞在细胞生长平台期表现出差异性；在去核时间方面，16 hpm 组和 18 hpm 组胚胎卵裂率差异显著，囊 胚发育力差异不显著 (P0.05) ，16 hpm 组获得一只克隆羊，重复 16 hpm 获得4 只妊娠克隆羊。组织微卫星序 列经SDS分析，DNA 指纹与供体细胞相同。结论：去核前程序的优化保证了材料的质量，为提高克隆 胚胎数量和质量奠定基础，可以获得体细胞克隆羊。 : 核移植，卵巢保存时间，贴壁率，去核时间，克隆羊 Received: August 18, 2016; Accepted: March 17, 2017 Supported by: National Major Special Projects on New Cultivation for Transgenic Organisms (No. 2016zx08008-001), National Natural Science Foundation of China (No., Opening Foundation of Sheep Genetic Improvement and Healthy Production Laboratory (No. 2013KLS05), Foundation of Academician in Production and Construction of Xinjiang (No. 2014BB023).