高效液相色谱-02精要.ppt

第七章高效液相色谱分析法 一、液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatograph 二、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph 三、离子交换色谱 ion-exchange chromatograph 四、离子色谱 ion chromatograph 五、离子对色谱 ion-pair chromatograph 六、排阻色谱 size- exclusion chromatograph 七、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 7.1HPLC的分类与基本原理 7.1.1 高效液相色谱法的分类 7.1高效液相色谱法的分类 7.3 各类高效液相色谱法7.3.1 吸附色谱法 LSC 1. 分离机理　吸附色谱法是被分离的组分分子(溶质分子)与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，因溶质分子的吸附系数的差别而分离。 2. 影响容量因子(k)的因素　以硅胶吸附剂为例： ⑴ 硅胶与溶质分子的亲和力顺序：k大者后出峰。 kmin→饱和烃＜芳烃＜…＜酯醛酮＜…＜羧酸→kmax ⑵ 溶质的极性：常用流动相是以烷烃为底剂，加入适当的极性溶剂组成二元或多元溶剂系统，从而能调整溶解的极性，控制组分的保留时间。溶剂系统的极性越大，洗脱力越强。 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 7.3 各类高效液相色谱法7.3.2 分配色谱法(LLC) 1. 分离机理：分配色谱法是由于样品组分溶入固定相(s)与流动相(m)达到“平衡”后的分配系数的差别而分离。组分在固定相与流动相中的溶解度差别越大(K、k差别也大) 分离效果越好。 2. 正相液－液色谱法(NLLC)：流动相极性小于固定相极性的LLC称为NLLC。正相洗脱时样品中极性小的组分先流出色谱柱，极性大的组分后流出色谱柱. 3. 反相液－液色谱法(RLLC)：流动相极性大于固定相极性的LLC称为RLLC。反相洗脱时样品中极性大的组分先流出色谱柱，极性小的组分后流出色谱柱. 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 7.3.3离子交换色谱ion-exchange chromatography 7.3.4 离子色谱ion chromatography 7.3.5排阻色谱色谱size- exclusion chromatography 7.3.6 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 7.3.7 化学键合色谱法 化学键合相：将具有官能团的固定相键合到载体表面，构成化学键合相。 化学键合色谱法：以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合色谱法(bond phase chromtography)。 特点：既有分配作用，又有吸附性能。 7.3.7 化学键合色谱法 7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法 7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法 ⑴ 分离机理　反相键合相表面具有非极性烷基官能团和未被取代的硅醇级，分离机理较复杂，有疏溶剂理论、双保留机理、顶替吸附－液相相互作用模型等。 疏溶剂理论：把非极性的烷基键合相看作一层键合在硅胶表面上的十八烷基的“分子毛”，它有较强的疏水特性。如图10-4所示。 7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法 当用极性溶剂为流动相来分离含有极性官能团的有机化合物时，一方面分子中的非极性部分与固定相表面上的疏水烷基产生缔合作用，使它保留在固定相中；另方面被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，促使它离开固定相，并减小其保留作用。结果两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。 7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法 7.3.7 化学键合色谱法2.正相键合色谱法 正相键合色谱法(NBPC)：固定相一般以氰基或氨基等极性基团作为键合相；流动相以烷烃(正己烷)中加入适量的极性调整剂(如氯仿、甲醇、乙腈等)为流动相。用途主要用于分离极性不同的化合物、异构体，特别适用于分离不同类型的化合物。 ⑴ 分离机理　主要靠组分分子与固定相之间的范德华力、氢键作用力的差别而进行分离。 ⑵ 流动相的极性与容量因子的关系 　 作正相洗脱时，流动相的极性增大，洗脱能力增加，k减小， tR减小；反之，k 与tR增大。分离结构相近的组分时，极性大的组分后出峰。 7.3.7 化学键合色谱法3.离子对色谱法 7.3.7 化学键合色谱法4.离子抑制色谱法 在反相色谱法中，通过调节流动相的pH值，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，这种技术称为离子抑