Tspan8过表达与肝癌上皮间变及转移的关系.pdfVIP

中华肝胆外科杂志却16 年 11 月第22 卷第 11 期 Chin J Hep刨出iliarv Surg ,Novernber 2016 ,Vol. 22 ,No. 11 .775. ·实验研究· Tspan8 过表达与肝癌上皮间变 及转移的关系 武金才周开伦陈家诚陈良唐荣陈骋许达峰郑进方张震生李灼日 {摘要] 目的 探讨四跨膜蛋白 Tspan8 表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制。方法 利用前期构建的 TSPAN8 shRNAs 慢病毒质粒并筛选稳转细胞株 MHCC97咀-LV-GFP咄RNA-Tspan8 ， 沉默Tspan8 基因表达。 WST 法检测细胞增殖变化;蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶 12 表达改变;应 用 Transwell 检测细胞侵袭能力变化;5.0 X 106 肝癌细胞肝内注射行体内实验，检测肿瘤生长及肺转 移情况。在层蒙古蛋白-5 ( 1aminin-5) 作用于肝癌细胞株 MHCC97-H-Mock 和 MHCC97-H咄RNA-Tspan8 两天后，观察2 组细胞形态差异，是否发生 EMT 改变并检测上皮及间质分子标志物。进一步应用免 疫共沉淀和荧光分析Tspan8 可否与整合素畸形成复合物。结果 体内外实验显示，与 Tspan8-RNA 干扰的 MHCC-97H 细胞(MHCC97-H-shRNA-Tspan8 )比较，Tspan8 高表达的肝癌细胞 MHCC-97H 和 对照组 MHCC97-H-Mock (LV-GFP) 增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强 (P 0. 05) 0 MHCC97-H-shRNA-Tspan8 细胞中 MMP-12 表达抑制明显，细胞侵袭能力明显下降。进 一步的研究显示:在层黠蛋白-5 的诱导下四跨膜蛋白 Tspan8 可与 α6 结合并诱导高表达肝癌细胞 MHCC97-H 发生上皮间质转化，而在 RNA 干扰组肝癌细胞中(MHCC97-H咄RNA-Tspan8 )未见发生; 免疫共沉淀显示Tspan8 可与结合形成复合物，提示 Tspan8 偶联 α6 后形成复合物并可促进肝癌 侵袭转移。结论 四跨膜蛋白 Tspan8 表达与肝癌侵袭转移正相关，并可能与整合素 α6 结合而诱导 肝癌细胞发生上皮间质转化有关，是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。 [关键词] 肝细胞癌; 四跨膜蛋白，Tspan8; 上皮间质转变; 转移 基金项目:国家自然科学基金、 ;海南省自然科学基金(81255 、814318) Association of Tspan8 over-expr臼sion with epitheliaI-mesenchymal transitions and metastasis in hepatoωlIular carcinoma Wu Jincai , Z Jwu Kailun , Chen Jiacheng , Chen μαng， Tang Rong , Chen Cheng , Xu Dafeng , Zheng Ji呐晤， Zhang Zhensheng ， μ ZJwuri. Department of HepαtobiliaTγ Surgery Orgα， n Transplantation , Hainan Provincial People 5 Hospital , Ha忱。u 570311 , Chinα Corresponding Authors: Li Z Jwuri , Ernail: lizhωri(】898@ 126. com [ Abstract] Objec笛ve To investigate the association of Tspan8 expression with hepatocellu1ar c缸C)­ noma (HCC) invasion and metastasis , and further exp10re the potential mechanism invo1ved. Methods Ts- pan8 shRNAs vector