中药药理毒理研究技术细则若干问题的探讨.ppt

中药药效毒理研究 技术规范若干问题的探讨 北京中医药大学 中药学院 中药药理系 孙建宁 教授 中药药效评价的现状与探索 中药新药的基本要求是安全、有效、可控和稳定。 侯选样品 ------- 药效学 ---------侯选药物 毒性研究 药效学研究的基本目的 （一）通过药效学研究确定有效性 是否有效、作用的强弱、优缺点和特色，确定有无开发前景。 重视前期药效的筛选，力求得到较准确的药效评价。设法找出主要药效学的特点、有效作用剂量范围（量效关系）、有效作用时间长短（时效关系）。 （二）提高临床疗效 应充分运用现代科学特别是现代医学的理论、方法和手段，制定科学、严密、具有中医药特点的试验计划 ，建立与临床相符的 “病” “症”或“证”相似的动物模型与指标，对新药的有效性作出科学的评价。 药效研究参考资料: 1、中药新药研究指南（药学 药理学 毒理学）中华人民共和国卫生部药政管理局，1994：66-67 2、中药新药研制开发技术与方法 王北婴、李仪奎主编 上海科学技术出版社2001.12 3、中药复方研究思路与方法 （2004年出版） 4、中药药理研究方法学 陈奇主编 人民卫生出版社（1993年版、新版待出） 5、中药药理方法学李仪奎主编 上海科学技术出版社 1991 6、国内外研究论文 二.药效学研究的基本要求 试验负责人 受试药物 研究单位 实验动物 试验记录 统计处理 三、药效学研究的方法及注意事项 1、实验设计 符合中药特点；符合国家新药研究申报的有关规定；随机、对照、重复 重视中药复方配伍规律性的研究: (1)单味研究法 (2)药对研究法 (3)药物组间关系法 (4)撤药分析法 (5)聚类分析法 (6)正交设计法 (7)正交t值法 (8)均匀设计法 (9)量效关系法 撤药分析法: 从复方中撤出一味或一组药进行实验 黄芩汤:黄芩、芍药、甘草、大枣 结果：减黄芩显著影响药效，分别减芍药、甘草、大枣变化不大。说明君药在全方中起主导地位。 均匀设计法： 按均匀设计表安排，实验次数与各因素所取水平数相等。 如治疗感染复方（五种中药X1、X2、X3、X4、X5）。根据因素与水平，选用U11表设计，结果算得回归方程，有显著性意义，从标准相关系数可看出药物（抗炎）作用大小，进行优选。 量效关系法： 四君子汤：党参、白术、茯苓、甘草 1 ： 1 ： 1 ：0.5 巨噬细胞吞噬功能增强，调整甘草到1/3，功能减弱。 当归补血汤: 黄芪、当归 5 ： 1 免疫增强作用，调整黄芪剂量（1/2、2、4倍）均作用不明显。 2、动物选择 种类：实验常用小鼠和大鼠 、豚鼠 、家兔 、狗 品系 动物等级：二级动物即清洁动物（CL）性别：一般试验选用雌雄各半动物。 数量：一般小鼠不得少于10只，大鼠为8只，猫、狗为4只以上 3、方法的选择 （一）根据主治，参考功能，选择试验方法 针对性强、重点突出、主次分明。 如缺血性中风: 1．增加缺血区脑血流量 2．神经细胞的保护治疗 中药治疗缺血性中风主要药效学研究方案 （一）对脑缺血试验 选用大鼠大脑中动脉血栓模型(middle cerebral artery thrombosis,MCAT)和双侧颈总动脉阻断致不完全性脑缺，观察连续给药2-3天对局部脑缺血和不完全性全脑缺血性损伤的保护作用。 (1) 大鼠神经症状检测：根据改进的 Bedorson等人的分级打分法记分。 (2)对 MCAT大鼠脑水肿的影响：分别称量脑缺血侧和非缺血侧脑组织湿重和干重，以脑水含量百分比为指标。 (3)药物对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响：采用TTC染色法，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比为指标。 (4)生化指标:包括能量代谢和毒性产物，如三磷酸腺苷（ATPase）、磷酸肌酸（Per）、乳酸（LA）、乳酸脱氢酶（LDH）、自由脂肪酸（FFA）、脂质过氧化物（LPO）、兴奋性氨基酸（EAA）及基因表达等。