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基因工程复习提纲-包涵体补充.pdf
（4 ）包涵体的变性-复性操作
包涵体的溶解与变性：
包涵体的溶解与变性的主要任务是在人工条件下，拆开包涵体内
蛋白质中错配的二硫键和次级键，使包涵体溶解并重新进入复性途
径。能有效促进包涵体溶解变性的试剂和条件包括：
清洗剂：SDS、正十二醇肌氨酸。廉价，但影响复性和纯化
促溶剂：盐酸胍、尿素。前者昂贵，尿素便宜，但常被自发形
成的氰酸盐污染，后者能与多肽链中的氨基反应。
混合溶剂：如尿素与醋酸、二甲亚砜等联合使用，溶解力强。
极端pH ：廉价，但许多蛋白质在极端pH条件下发生修饰反应。
2011-10-22 目的基因在宿主中的表达 37
包涵体的复性与重折叠（refolding ）：
包涵体的复性与重折叠的主要任务是：将多肽链中被拆开的游离
巯基重新折叠；通过次级键的形成使蛋白质复性。
包涵体复性操作的方法包括：
一步稀释法：蛋白复性与浓度无关，但集聚与浓度关系很大。
分段稀释法：逐步降低变性剂的浓度，防止二次集聚的发生。
试剂添加法：精氨酸、甘氨酸、甘油、蔗糖、PEG 、Ca 2+ 。
蛋白修饰法：氨基柠檬酸酐酰化，蛋白带负电，抑制集聚。
产物隔离法：将变性的蛋白分子固定化，避免其相互碰撞。
分子伴侣法：GroEL、GroES、DnaK ，固定化，共表达。
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包涵体的复性与重折叠（refolding ）：二硫键形成
在包涵体变性体系中，始终存在着还原剂，使多肽链中的巯基保持
还原状态，防止二硫键错配导致严重的集聚。在变性操作结束后，这
些游离型的巯基必须重新配对形成二硫键，此时多肽链也重新发生折
叠。形成二硫键的方式主要有：
化学氧化法（A ）：需要电子受体，最廉价的电子受体为空气，二
硫键形成是随机的，仅适用于那些不含游离半胱氨酸残基的蛋白质的
重折叠。
二硫键交换（B ）：需要还原型和氧化型谷胱甘肽（GSH和
GSSG ），二硫键形成相对特异，因此适用性较广，重折叠效果好。
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