《中国药典》薄层色谱的基本要求选编.pptVIP

注意 （1）使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应斑点（可参 照制法对药材进行前处理），供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的 1~2个次要斑点相对应 （2）尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到 节约资源、保护环境、简便实用的目的 （3）注意”过柱“的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同 （4）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点样 量过大分离度差，点样量可减少 薄层色谱应用的影响因素 样品预处理 薄层色谱的点样技术 吸附剂活性 溶剂蒸汽在薄层色谱中的应用 温湿度对薄层色谱的影响 薄层色谱的优化及溶剂系统（展开剂）的选择 薄层板 样品预处理 要得到一个较为清晰的色谱，样品提取物经预处理，使供试品溶液得以净化，往往是一个重要的有时甚至是关键的步骤 提取溶剂的要求：溶解度不宜太大，黏度不宜太高，沸点适中 供试品溶液净化的方法 （1）单一溶剂提取法 根据被测物质的化学特性，有选择性地采用某种溶剂直接提取制备。（如浙贝母、平贝母、华山参、洋金花等） （2）分段提取法； 被检测样品不同极性部位分别提取后制成相应供试液，分别检测分析（如丹参） （3）特殊提取方式 如蜜丸等含糖较高又有黏性的样品，有机溶剂较难渗透到样品的内部，可加硅藻土、滑石粉等分散剂共同研匀后再提取。 供试品溶液净化的方法 （4）液-液萃取法 利用样品与杂质在两相（水相和有机相）中溶解度的不同，达到净化目的。 特别适合合剂、口服液、糖浆剂、注射剂等的处理。 （5）固-液萃取法 固相小柱萃取基本上是基于吸附、键合相分配、正相、反相、离子对、离子交换原理富集待测成分，去除部分杂质。 点样 点状或条带状点样？ 点状点样： 简单快速 缺点：接触式点样，易损伤薄层板表面 点样量小 斑点容易点大，易产生容积环形色谱效应，影响 分离效果 条带状点样 优点：一般喷雾式，不损伤薄层板表面 点样量比点状点样大 原点不会上下扩散，分离度增加 点样 点多少？ 常规的TLC：0.5-5μl， 高效TLC：HPTLC： ＜ 1μl； 用什么点？ 常规：手工一般使用定量毛细管（0.5/1/2和5μl），点样是毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方向小心接触TLC/ HPTLC板面，（玻璃毛细管不易损伤预制板的板面），切忌斑点或条带在原点因溶剂过大造成原点的扩散，一般建议控制在5μl以下。 装置：手工点样器 半自动点样器 全自动点样器 展开-展开溶剂 使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯” 有毒试剂如“苯”禁用，“三氯甲烷”慎用（三氯甲烷目前仍有使用，否则许多鉴别无法进行，有的例子是难以取代的）； 溶剂组成采用体积比（如乙酸乙酯-甲醇-甲酸=8:2:0.1，或写作80:20:1 V/V/V)。甲酸一般虽然用量很微，但应准确加入。 溶剂总量应足以使薄层板的浸入深度约为5mm（展开剂量的多少会影响斑点的Rf值） 展开剂要求新鲜配制，一般不用多次反复使用， 如展开溶剂混合放置后有分层现象，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。 展开-饱和与预平衡 溶剂的蒸气相在展开缸中也参与色谱展开而形成三维的层析过程，即固相-板上的吸附剂、液相-展开剂、气相-溶剂蒸气三相相互作用； 如处理不好，会产生如下现象： 展开过程中展开剂的组分被固定相分离产生第二前沿。 未平衡或平衡时间不够易产生边缘效应。 该怎样饱和呢？ 展开缸预平衡或饱和：展开前将展开剂置展开缸中，其蒸气在展开缸中平衡一段时间（15-20min）后迅速放入薄层板展开； 预吸附：将薄层板放在展开缸中，不与展开剂接触，吸附一定量的溶剂蒸气可以改变层析行为，得到不同的色谱； 饱和方式 方法A（展开缸、薄层板均不饱和） 方法B（展开缸饱和、薄层板不饱和） 方法C（展开缸、薄层板均饱和） 展开-展开剂优化 展开剂在色谱展开中起着关键作用，至今植物药分析的薄层展开剂的优化基本上还是依靠经验。主要是因为植物药含有太多的未知成分，色谱行为各不相同，所以试错法仍然是中药分析实验室在选择展开剂时最常用的方法（包括借鉴他人的经验） 展开剂的优化 主要考虑两方面：溶剂的极性和溶剂的选择性。 前者要求使待分离的主要物质的Rf值在0.3~0.7之间；当Rf值符合要求后，进行等强度溶剂替换，直到分离度达到要求为止。 对于硅胶等吸附薄层和正相分配色谱来说，展开剂的极性越大，溶剂强度就越大，洗脱能力就越强，即同一物质在薄层板上的Rf值越大。