龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选.docVIP

　　龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选 作者：曹悦，左代英，王维宁，刘敬武，孙启时 【摘要】 目的建立龙胆最佳提取工艺，为龙胆的种植和质量研究奠定基础。方法采用L9(34)正交表安排实验,确定最佳提取条件。色谱柱为Shimadzu C18(3.0 mm×75 mm, 1.7 μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V= 5.5∶94.5)，流速0.80ml/min;检测波长235，270 nm;柱温为40℃。结果影响因素最大的是提取溶剂，其次是提取方法，最小的是提取时间。结论各因素较优的水平组合为A1B1C1，即甲醇超声提取30 min。 【关键词】 龙胆; 正交实验设计法; 獐牙菜苦苷; 龙胆苦苷 　　Abstract：ObjectiveTo establish best extraction process of Gentiana scabra Bge.by UPLC so as to provide base for the plant and research of Gentiana scabra Bge. MethodsBy L9(34)orthogonal design , the optimal condition ed as folloadzu C18(3.0 mm×75 mm,1.7μm), Acetonitrile-0.1% Phosphorylation(V∶V = 5.5∶94.5) as nl/min, detection and 270nm and the columne temperature ost effective factor ,the second ethod，and the last e. ConclusionThe best extraction process is A1B1C1 : super sonic extraction for 30 min in methanol. 　　Key arin ; Gentiopicroside 　　龙胆为龙胆科植物条叶龙胆Gentiana manshurica Kitag.，龙胆Gentiana scabra Bge.，三花龙胆Gentiana triflora Pall.或坚龙胆Gentiana rigescens Franch.的干燥根及根茎[1]。具有清热燥湿、泻肝胆火的作用。我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等地。 现代 药理研究证明,龙胆苦苷具有显著的肝脏保护、抗炎、抗病原微生物、中枢兴奋及健胃利胆等作用,与中医对龙胆的应用基本上一致[2]。龙胆的主要有效成分为环烯醚萜类化合物，有龙胆苦苷(Gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(Sarin)及獐牙菜苷(Sg/ml和0.3mg/ml的溶液。 　　2.2 色谱条件色谱柱为Shimadzu C18 (3.0mm×75 mm, 1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(5.5∶94.5)，流速0.8ml/min，检测波长分别为235 nm和270 nm，柱温40℃，进样量4 μl。 　　2.3 实验因素与水平根据预实验结果,以提取溶剂、提取方法、提取时间3个因素，每个因数3个水平，采用L9(34)正交表安排实验。见表1。表1 实验因素与水平 　　2.4 正交实验称取龙胆药材27份(药材来源于辽宁省龙胆药材GAP生产基地) ,按表2安排实验。以龙胆苦苷、獐牙菜苦苷的含量加和为指标,采用直观分析法、方差分析,确定最佳工艺条件。综合评分结果=獐牙菜苦苷含量+龙胆苦苷含量。表2 正交实验方案及结果 　　2.5 极差分析与方差分析对表2数据分析，结果见表3～4。　表3 直观分析结果表4 方差分析 　　由方差分析的结果，可以看出条件，Agt;Bgt;C，结合直观分析，确定最佳提取工艺为：A1gt;B1gt;C1，即甲醇超声提取30 min。 　　2.6 獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的测定 按照上述的条件，取龙胆药材，测定。两个指标性成分，精密度实验：RSD分别为1.92%,0.32%(n=5);稳定性实验：16 h内稳定性良好，峰面积RSD分别为1.65%,0.31%;重复性实验：RSD分别为0.79%,2.0%(n=6);回收率实验：獐牙菜苦苷的平均回收率102.09%，RSD为1.68%(n=6);龙胆苦苷的平均回收率103.80%，RSD为1.11%(n=6)。 　 　3 讨论 　　本实验采用的药材来源于辽宁省龙胆药材GAP生产基地，所考察的指标将对品种的种植和采收期的确定有很大的指导意义。影响龙胆提取率的因素也很多，如溶剂类别、浓度、提取方法、提取时间、药材粉碎度、温度、提取次数等因素，但结合药材采收后的特点，我们选择了提取溶剂、提取方法、提取时间这3个较为关