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两种检验水质总大肠菌群方法的比较研究 　　摘 要:总大肠菌群是评价水环境质量的重要卫生指示菌之一,水质总大肠菌群的监测检验对保障人体健康和维护良好的生态环境有着重要的意义。选择山东省内有代表性的210份不同水质分别用多管发酵法和纸片法进行检验比较,经过分析,发现纸片法比多管发酵法更适合于日常水质环境的监测检验。 　　关键词:总大肠菌群;多管发酵法;纸片法;比较研究 　　中图分类号:X83 　　文献标识码: A 　　文章编号:1005-569X(2009)06-0027-02 　　 　　1引言 　　 　　总大肠菌群是评价水环境质量的重要卫生指示菌之一,水质总大肠菌群的监测检验对保障人体健康和维护良好的生态环境有着重要的意义。按照国家标准,对于水质总大肠菌群的检验,常采用传统的多管发酵法[ 1,2 ]。但传统方法实验前要配制大量的初发酵、复发酵以及选择性培养基,操作繁琐, 费时费力,而且,当需要检验的样品量特别大时,来不及做到快速及时的检测,不利于水质环境的日常监测和监督管理。 　　用纸片法进行检测,可以避免繁琐的前期准备工作,提高工作效率。但是纸片法目前还未纳入国家标准方法,对于其检验的精确性等问题,有待进行试验考证和分析评价。为此,我们选择山东省内有代表性的210份不同水质,分别用多管发酵法和纸片法进行比较检验,发现两法的检测结果是一致的。而且纸片法更容易观察结果,具有简便、快速、省时省力等优点。因此,我们认为应该用纸片法来代替发酵法应用于水质日常监测检验工作中。 　　 　　2 材料与方法 　　 　　2.1样品来源 　　本项实验用无菌广口瓶盛装采集水样,共采集山东省内7个不同地市的210份地下水、地表水和污水水样进行检测,分别代表不同水质。 　　2.2 材料与试剂 　　乳糖胆盐发酵培养基(批号081215)、营养琼脂(批号080102)、EMB琼脂(批号070713)、乳糖复发酵培养基(批号071012)均为北京陆桥公司产品,按使用说明配制备用。 　　 总大肠菌群检测纸片由山东省疾病控制中心提供。 　　2.3 实验原理、方法 　　2.3.1 多管发酵法 　　多管发酵法是根据总大肠菌群应具有的生物特性,如革兰氏阴性无芽胞,在37 ℃,24 h 内能发酵乳糖并产酸产气,能在选择性培养基上产生典型菌落。实验前要配制大量的初发酵、复发酵及选择性培养基。多管发酵法按照国家标准GB/T5750.12-2006以及《水和废水监测分析方法》(第四版)进行操作检验,即乳糖胆盐发酵试验(初发酵) 、平板分离培养、乳糖发酵证实试验(复发酵)。 　　2.3.2 纸片法 　　纸片法快速检测大肠菌群的原理[ 3 ]是利用纸片上的营养,使大肠菌群迅速生长繁殖,进一步分解乳糖产生酸,酸又能使溴甲酚紫指示剂由淡天蓝色转变成黄色,在黄色区域生长的大肠菌群所产生的脱氢酶使纸片上的基质分解脱氢,脱下氢转给受体氯化三苯四氮唑( TTC),此时TTC接受氢之后,由无色变成还原后不溶于水的红色物质―――三苯甲胺。纸片法检验步骤与多管发酵法基本类似,采取与多管发酵法相同的接种量。 　　 　　3 结果 　　 　　3.1实验结果观察比较 　　对所采集的水样进行检验,多管发酵初发酵试验若试管同时产酸产气,则为阳性管,需继续进行下一步的平板分离培养和乳糖复发酵证实试验。但是,对于比较脏的环境水样,总大肠菌群污染严重时,双料初发酵试验试管会全部变黄,并且颜色非常浑浊,很难观察到试管中小倒管内的产气情况,给试验结果的判断带来困难。而使用纸片法检验则避免了这一问题。根据纸片检验法的结果判定标准[ 4,5 ],只要纸片上出现红色斑点且周围变黄色,即为阳性结果,反之,即为阴性。 　　3.2不同水质阳性检出(管)张数比较 　　210份检样以24 h的结果判定,比较纸片法和多管酵法对于3种水质检测的阳性管(张)数。在表1中可以看出,对于3种不同水质,纸片法比多管发酵法的阳性检出率要高,这是因为纸片法更容易观察结果,避免了漏检的情况。 　　3.32种检测方法的符合率比较 　　210份检样以24 h的结果判定,表2中列出了2 种方法对210份样品检测结果,纸片法检出162 份,检出率为77.14%,发酵法检出156份,检出率为74.28 %,经统计学处理, 差异无统计学意义(χ2 =0.125,P 0.05),说明纸片法检测与国家标准方法的符合率很好。 　　 　　4 结论 　　 　　大肠菌群作为衡量水环境质量的两个主要卫生指标之一,按照国家标准检验方法,常采用传统的多管发酵法检验。但传统发酵法操作繁琐,检验前需要配置大量的培养基,不利于水环境质量的日常检测和监督管理。而纸片法避免了繁琐的前期准备工作,同时更容易观察结果,具有简