第十三章 生化药物制造工艺 酶.pptVIP

①盐析法。 在适当的pH、温度等条件下，保持酶的稳定，慢慢改变盐浓度进行结晶。 结晶时采用的盐有硫酸铵、柠檬酸钠、乙酸钠、硫酸镁和甲酸钠等。 * ②有机溶剂法。 酶液中滴加有机溶剂，有时也能使酶形成结晶。 结晶用的有机溶剂有：乙醇、丙醇、丁醇、乙腈、异丙醇、二恶烷、二甲亚砜、二氧杂环己烷等。用有机溶剂法易引起酶失活。 ③复合结晶法。 有时可以利用某些酶与有机化合物或金属离子形成复合物或盐的性质来结晶。 ④透析平衡法。 对一定的盐溶液或有机溶剂进行透析平衡，这时酶液可缓慢地达到过饱和而析出结晶。 * ⑤等电点法。 一般地说，在等电点附近酶的溶解度很小，这一特征为酶的结晶条件提供了理论根据。 （2）结晶条件的选择 在进行酶的结晶时，要选择一定条件与相应的结晶方法配合。这不仅为了能够得到结晶，也是为了保证不引起酶活力丧失。 影响酶结晶因素很多，下列几个条件尤为重要： * ① 酶的纯度。 总的来说酶的纯度越高，结晶越容易，长成大的单晶可能性也越大。 ② 酶的浓度。 结晶母液通常应保持尽可能高的浓度。酶的浓度越高越有利于溶液中溶质分子间的相互碰撞聚合，形成结晶的机会也越大，对大多数酶来说，蛋白质浓度为5～10mg／ml为好。