实验4 紫外分光光度法测定血清尿酸.pptVIP

2．继发性高尿酸血症 （1）尿酸排泄减少 为引起肾小球滤过减少和/或肾小管排泌尿酸减少的肾脏疾病所致。 （2）尿酸产生过多 见于核酸代谢增高时，如各类白血病、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、慢性溶血性贫血、全身扩散的癌症、恶性肿瘤化疗或放疗后和严重的剥脱性牛皮癣等。 * * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验4 紫外分光光度法测定血清尿酸 湘南学院医学检验系 蒋显勇 实验 4 紫外分光光度法测定血清尿酸 实验目的 掌握：紫外分光光度法测定血清尿酸基本原理。 熟悉：血清尿酸测定的临床意义。 了解：其他测定血清尿酸的方法。 实验原理 尿酸在293nm处有特定的紫外吸收，当经尿酸酶水解作用后，生成的产物尿囊素则无此特异性，因此尿酸酶催化前后吸光度的差值与尿酸浓度成正比。 试剂与器材 1．0.2mol/L硼酸-NaOH缓冲液（pH 9.5） 5．UV-3000岛津双波长/双光速自动记录分光光度计 2．1.9mg/ml尿酸酶 3．5 948.4μmol/L尿酸标准贮存液 4．594.84μmol/L尿酸标准应用液 操作步骤 1．于石英比色皿中加血清60μl，缓冲液3.0ml混合， 以空气为空白，测定尿酸在293nm处吸光度(A1)。 2．于上述比色皿中再加入尿酸酶液10μl混合，然后 测定反应后尿酸在293nm处对空气的吸光度(A2)。 3．测定尿酸酶的吸光值(Ae) 于两个石英比色皿中各 加入3.06ml缓冲液，一个加10μl尿酸酶液混匀， 另一个做参比皿，测定尿酸酶在293nm处的吸光 值。 计算 样品的△A=(A1+Ae)－A2 血清尿酸（μmol/L）= =△A×4058.13 式中0.075为当5.9484μmol/L尿酸被氧化时，通过1cm光径，在293nm 处吸光度。 参考范围 健康成人血清尿酸浓度： 男性: 208μmol/L ~428μmol/L； 女性: 155μmol/L ~357μmol/L。 临床意义 1．原发性高尿酸血症 （1）原发性肾脏排泄尿酸减少 占原发性80%～90%，为多基因性常染色体显性遗传所致。 （2）尿酸产生过多 以从头合成嘌呤过多占主要，占原发性10%～20%，也是多基因性常染色体显性遗传；而特异性酶缺陷，如次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）部分缺乏或完全缺乏等，导致鸟嘌呤和次黄嘌呤不能经补救途径合成嘌呤核苷酸，而使尿酸产生过多者，仅占原发性1%。 注意事项 1．本法需用高质量石英比色皿。 2．紫外分光光度计使用前需对其波长进行校正。 3．待测样品的尿酸浓度应控制在 172.504μmol/L~594.840μmol/L范围内。 4．注意控制反应条件即温度、时间及溶液pH值。 评价 测定尿酸的方法很多，但以尿酸酶紫外法最佳，其特异性和抗干扰性好，标本用量少，不需做无蛋白滤液，方法简便快速。